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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 病原/病毒 » 求肺炎克雷伯菌电击转化的实验步骤
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ptlyxiao

新虫 (正式写手)

[交流] 求肺炎克雷伯菌电击转化的实验步骤 已有2人参与

求高人指导!我从2月份开始一直做肺炎克雷伯菌感受态细菌，质粒电击转化，可就是一直转不进去，焦虑憔悴！求哪位高人有做过的能分享一下如何做的？谢谢！

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1楼 2019-04-10 08:23:53
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肥猫p

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我去年做过一些KP的电转化，操作过程与e.coli基本相同。Kp电转感受态制备大致为：摇OD至0.5左右，冰浴15min，用冰10%甘油洗涤2遍，液氮速冻后-80度冻存。
电击条件为：2.5kv, 200Ω， 25uF，2mm电转杯，bio-rad电转仪。电击后LB液体复苏1h，涂布相应抗性平板。
一般情况下，转化效率很高。

我看到你是感染专业的，是否你的KP是病人身上的临床分离菌株？有些临床分离菌株确实遗传操作较为困难。你可以换一个KP菌株试试，也许不是你电转的问题，而是那个菌株的问题。
祝实验顺利！
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2楼2019-05-05 19:54:05
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ptlyxiao

新虫 (正式写手)
谢谢🙏🌹🌹🌹！再请教一下您之前做的时候是用哪株kp？@肥猫p

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3楼2019-05-11 11:13:00
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分子-黄雁

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by 肥猫p at 2019-05-05 19:54:05
我去年做过一些KP的电转化，操作过程与e.coli基本相同。Kp电转感受态制备大致为：摇OD至0.5左右，冰浴15min，用冰10%甘油洗涤2遍，液氮速冻后-80度冻存。
电击条件为：2.5kv, 200Ω， 25uF，2mm电转杯，bio-rad电转 ...

您好，我想请问您电转化时质粒的量为多少

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4楼2019-05-14 16:59:58
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ptlyxiao

新虫 (正式写手)
50ul的感受态细胞加入1.0ul，2.0ul，2.5ul的质粒(8ml/L)。

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5楼2019-05-18 13:16:45
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