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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助：蛋白怎么没表达
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muchong5577

金虫 (正式写手)
我的IPTG浓度为0.4 mM 温度为37℃诱导8个小时啊
诱导开始的OD值没有测
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11楼2009-05-18 13:05:20
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lifefamily

★
muchong5577(金币+1,VIP+0):谢谢 ！ 5-18 18:19
我们一般是37℃摇菌，表达的话用37℃也可以，不过蛋白性质不好的话容易出现包涵体。
如果纯粹是不表达的话，那你肯定要用融合表达试试，比如GST或者Trx之类的。
如果融合后还不表达，那就要考虑是不是含有稀有密码子之类的，可能要换菌株。
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12楼2009-05-18 17:10:58
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jqq1985

银虫 (正式写手)
分开来表达吧
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13楼2009-05-18 18:05:18
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muchong5577

金虫 (正式写手)
是用双酶切，Ndel 和 Xhol
样品的处理是：离心收菌 ，加PBS和SDS上样buffer ，煮沸10 min
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14楼2009-05-18 21:15:01
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梧桐眼

金虫 (著名写手)
★
muchong5577(金币+1,VIP+0):呵呵 谢谢 5-19 20:37
至少有一个表达了嘛！ 加油啊 ！
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15楼2009-05-18 21:23:07
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loveleilei

★
muchong5577(金币+1,VIP+0):怎么会出现这样低级的错误呢 5-19 20:37
是不是转化BL21的质粒不是pet,而是TA克隆的T载体.你仔细鉴定一下试试
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16楼2009-05-19 19:42:29
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lifefamily

★
muchong5577(金币+1,VIP+0):谢谢 5-22 13:17
直接把菌液送到公司去测个序，又不贵。
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17楼2009-05-20 13:26:54
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