应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助：蛋白怎么没表达
171/2返回列表12下一页
查看: 705  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

muchong5577

金虫 (正式写手)

[交流] 求助：蛋白怎么没表达

各位虫友，帮帮我！
我pcr得到目的基因，TA克隆转了TOP10，然后酶切回收目的基因，连接到pET30a，转了BL21，从kan抗性板上挑到转化子，从转化子中提质粒酶切鉴定，小片段符合我目的基因的大小（大片段为载体啦），然后就IPTG诱导表达，SDS-PAGE检查怎么没看到我的目的片段呢。
ps： 一共有五个基因，从SDS胶上看，好像有一个表达啦，其它四个都没目的带。
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-05-16 18:58:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shenqicc

金虫 (小有名气)
★
muchong5577(金币+1,VIP+0):谢谢！ 5-16 20:02
这要看你要表达的蛋白的性质的吧，有可能本身就是有不同亚基的呢，BL21也不一定就都能表达的。。。
赞一下(2人) 回复此楼
Publish OR Perish!
2楼2009-05-16 19:35:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaocy8903

木虫 (知名作家)
★
muchong5577(金币+1,VIP+0):单独表达都没实现 ，还怎么融合表达咯. 5-16 22:09
可以考虑融合表达
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2009-05-16 20:17:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

muchong5577

金虫 (正式写手)
有几个我测序了的 start code 没突变啊
赞一下 回复此楼
4楼2009-05-16 22:14:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaocy8903

木虫 (知名作家)
★
muchong5577(金币+1,VIP+0):谢谢 5-17 22:30
融合表达就是为了部分解决单独不能表达的
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2009-05-17 08:38:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mimisikai

金虫 (小有名气)
★
muchong5577(金币+1,VIP+0):谢谢 5-17 22:30
多挑几个菌试试
回复此楼
6楼2009-05-17 09:01:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

大海一孤舟

铜虫 (小有名气)
★
muchong5577(金币+1,VIP+0):谢谢 5-17 22:30
不是每个转化好的菌都能表达的，还要有跟你要表达的基因有很大的关系的
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2009-05-17 13:23:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuer413023

至尊木虫 (文坛精英)

没事领金币
有没有形成包涵体啊
赞一下 回复此楼
上邪!我欲与君相知，长命无绝衰。山无陵，江水为竭，冬雷震震，夏雨雪，天地合，乃敢与君绝！
8楼2009-05-17 23:59:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蓝色基因

金虫 (正式写手)
★
muchong5577(金币+1,VIP+0):谢谢 5-18 13:00
首先，酶切是单酶切和双酶切都做了吗？有做测序鉴定没有？

你加入IPTG诱导时温度控制是多少？我们实验室控制在15-25度之间，37度诱导效果反而不好。

还有，加IPTG是OD值是多少，0.6么，这个会有一定的影响，但不是主要因素。
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2009-05-18 09:43:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yoyocan

金虫 (正式写手)
IPTG 诱导很关键！ 你要多尝试几次！
赞一下 回复此楼
10楼2009-05-18 10:34:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 muchong5577 的主题更新
171/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂323材料与化工 +4 1124361 2026-03-24 4/200 2026-03-25 11:19 by shulmg
[考研] 287求调剂 +10 晨昏线与星海 2026-03-19 11/550 2026-03-25 10:35 by userper
[考研] 295求调剂 +6 一志愿京区211 2026-03-18 8/400 2026-03-25 10:28 by userper
[考研] 303求调剂 +5 元夕元 2026-03-20 6/300 2026-03-25 09:48 by 雾散后相遇lc
[考研] 上海电力大学材料防护与新材料重点实验室招收调剂研究生（材料、化学、电化学，环境） +4 我爱学电池 2026-03-23 4/200 2026-03-25 00:59 by 1027_324
[考研] 0854AI CV方向招收调剂 +3 章小鱼567 2026-03-23 3/150 2026-03-24 20:25 by 汪！？！
[考研] 材料专硕331求调剂 +4 鲜当牛 2026-03-24 4/200 2026-03-24 15:58 by JourneyLucky
[考研] 279分求调剂 一志愿211 +18 chaojifeixia 2026-03-19 20/1000 2026-03-24 10:34 by dolphin_ycj
[考研] 一志愿华东理工大学081700，初试分数271 +5 kotoko_ik 2026-03-23 6/300 2026-03-24 10:29 by 学术搬砖er
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境，总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-23 8/400 2026-03-23 20:36 by Creta
[考研] 接收2026硕士调剂(学硕+专硕) +4 allen-yin 2026-03-23 6/300 2026-03-23 15:04 by 汪！？！
[考研] 308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-21 3/150 2026-03-22 16:54 by i_cooler
[考研] 298求调剂一志愿211 +3 上岸6666@ 2026-03-20 3/150 2026-03-22 15:50 by ColorlessPI
[考研] 一志愿华南师大 070300（化学）304分求调剂 +3 0703武芊慧雪304 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:48 by JourneyLucky
[考研] 南京大学化学376求调剂 +3 hisfailed 2026-03-19 6/300 2026-03-20 23:43 by hisfailed
[考研] 288求调剂 +16 于海海海海 2026-03-19 16/800 2026-03-20 22:28 by JourneyLucky
[考研] 329求调剂 +9 想上学吖吖 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:01 by luoyongfeng
[考研] 求调剂一志愿南京航空航天大学289分 +3 @taotao 2026-03-19 3/150 2026-03-20 21:34 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 eation27 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:32 by JourneyLucky
[考研] 320求调剂0856 +3 不想起名字112 2026-03-19 3/150 2026-03-19 22:53 by 学员8dgXkO
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭