应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助：蛋白怎么没表达
171/2返回列表12下一页
查看: 695  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

muchong5577

金虫 (正式写手)

[交流] 求助：蛋白怎么没表达

各位虫友，帮帮我！
我pcr得到目的基因，TA克隆转了TOP10，然后酶切回收目的基因，连接到pET30a，转了BL21，从kan抗性板上挑到转化子，从转化子中提质粒酶切鉴定，小片段符合我目的基因的大小（大片段为载体啦），然后就IPTG诱导表达，SDS-PAGE检查怎么没看到我的目的片段呢。
ps： 一共有五个基因，从SDS胶上看，好像有一个表达啦，其它四个都没目的带。
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-05-16 18:58:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shenqicc

金虫 (小有名气)
★
muchong5577(金币+1,VIP+0):谢谢！ 5-16 20:02
这要看你要表达的蛋白的性质的吧，有可能本身就是有不同亚基的呢，BL21也不一定就都能表达的。。。
赞一下(2人) 回复此楼
Publish OR Perish!
2楼2009-05-16 19:35:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaocy8903

木虫 (知名作家)
★
muchong5577(金币+1,VIP+0):单独表达都没实现 ，还怎么融合表达咯. 5-16 22:09
可以考虑融合表达
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2009-05-16 20:17:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

muchong5577

金虫 (正式写手)
有几个我测序了的 start code 没突变啊
赞一下 回复此楼
4楼2009-05-16 22:14:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaocy8903

木虫 (知名作家)
★
muchong5577(金币+1,VIP+0):谢谢 5-17 22:30
融合表达就是为了部分解决单独不能表达的
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2009-05-17 08:38:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mimisikai

金虫 (小有名气)
★
muchong5577(金币+1,VIP+0):谢谢 5-17 22:30
多挑几个菌试试
回复此楼
6楼2009-05-17 09:01:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

大海一孤舟

铜虫 (小有名气)
★
muchong5577(金币+1,VIP+0):谢谢 5-17 22:30
不是每个转化好的菌都能表达的，还要有跟你要表达的基因有很大的关系的
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2009-05-17 13:23:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuer413023

至尊木虫 (文坛精英)

没事领金币
有没有形成包涵体啊
赞一下 回复此楼
上邪!我欲与君相知，长命无绝衰。山无陵，江水为竭，冬雷震震，夏雨雪，天地合，乃敢与君绝！
8楼2009-05-17 23:59:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蓝色基因

金虫 (正式写手)
★
muchong5577(金币+1,VIP+0):谢谢 5-18 13:00
首先，酶切是单酶切和双酶切都做了吗？有做测序鉴定没有？

你加入IPTG诱导时温度控制是多少？我们实验室控制在15-25度之间，37度诱导效果反而不好。

还有，加IPTG是OD值是多少，0.6么，这个会有一定的影响，但不是主要因素。
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2009-05-18 09:43:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yoyocan

金虫 (正式写手)
IPTG 诱导很关键！ 你要多尝试几次！
赞一下 回复此楼
10楼2009-05-18 10:34:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 muchong5577 的主题更新
171/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料学调剂 +7 提神豆沙包 2026-02-28 9/450 2026-03-01 11:50 by 王伟要上岸啊
[考研] 材料284求调剂，一志愿郑州大学英一数二 +7 想上岸的土拨鼠 2026-02-28 7/350 2026-03-01 11:44 by 月下best
[考研] 求调剂 +5 repeatt?t 2026-02-28 5/250 2026-03-01 11:43 by 王伟要上岸啊
[考研] 317一志愿华南理工电气工程求调剂 +6 Soliloquy_Q 2026-02-28 11/550 2026-03-01 11:14 by 歌liekkas
[考研] 寻找调剂 +4 LYidhsjabdj 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:56 by sunny81
[考研] 311求调剂 +9 南迦720 2026-02-28 10/500 2026-03-01 10:55 by sunny81
[硕博家园] 2025届双非化工硕士毕业，申博 +3 更多的是 2026-02-27 4/200 2026-03-01 10:04 by ztg729
[硕博家园] 博士自荐 +6 科研狗111 2026-02-26 10/500 2026-03-01 10:02 by 科研狗111
[考研] 272求调剂 +4 材紫有化 2026-02-28 4/200 2026-03-01 09:20 by L135790
[考研] 298求调剂 +5 axyz3 2026-02-28 5/250 2026-03-01 06:45 by 刘兵
[考研] 272求调剂 +4 田智友 2026-02-28 4/200 2026-03-01 06:43 by 刘兵
[考研] 285求调剂 +6 满头大汗的学生 2026-02-28 6/300 2026-03-01 06:29 by Trying]
[考研] 304求调剂 +3 52hz~~ 2026-02-28 5/250 2026-03-01 00:00 by 52hz~~
[考研] 295求调剂 +5 19171856320 2026-02-28 5/250 2026-02-28 21:39 by gaoxiaoniuma
[考研] 264求调剂 +3 巴拉巴拉根556 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:31 by gaoxiaoniuma
[考研] 276求调剂 +3 路lyh123 2026-02-28 4/200 2026-02-28 19:45 by 路lyh123
[考研] 0856材料求调剂 +10 hyf hyf hyf 2026-02-28 11/550 2026-02-28 18:50 by 无际的草原
[高分子] 求环氧树脂研发1名 +3 孙xc 2026-02-25 11/550 2026-02-28 16:57 by ichall
[考研] 0856调剂 +3 刘梦微 2026-02-28 3/150 2026-02-28 13:22 by houyaoxu
[硕博家园] 【博士招生】太原理工大学2026化工博士 +4 N1ce_try 2026-02-24 8/400 2026-02-26 08:40 by N1ce_try
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭