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muchong5577

金虫 (正式写手)

[交流] 求助:蛋白怎么没表达

各位虫友,帮帮我!
我pcr得到目的基因,TA克隆转了TOP10,然后酶切回收目的基因,连接到pET30a,转了BL21,从kan抗性板上挑到转化子,从转化子中提质粒酶切鉴定,小片段符合我目的基因的大小(大片段为载体啦),然后就IPTG诱导表达,SDS-PAGE检查怎么没看到我的目的片段呢。
ps: 一共有五个基因,从SDS胶上看,好像有一个表达啦,其它四个都没目的带。
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loveleilei


muchong5577(金币+1,VIP+0):怎么会出现这样低级的错误呢 5-19 20:37
是不是转化BL21的质粒不是pet,而是TA克隆的T载体.你仔细鉴定一下试试
16楼2009-05-19 19:42:29
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查看全部 17 个回答

shenqicc

金虫 (小有名气)


muchong5577(金币+1,VIP+0):谢谢! 5-16 20:02
这要看你要表达的蛋白的性质的吧,有可能本身就是有不同亚基的呢,BL21也不一定就都能表达的。。。
Publish OR Perish!
2楼2009-05-16 19:35:17
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)


muchong5577(金币+1,VIP+0):单独表达都没实现 ,还怎么融合表达咯. 5-16 22:09
可以考虑融合表达
3楼2009-05-16 20:17:55
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muchong5577

金虫 (正式写手)

有几个我测序了的 start code 没突变啊
4楼2009-05-16 22:14:30
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