应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » qPCR引物设计问题（急急急急急！）
51/1返回列表
查看: 1980  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

狂暴小子

新虫 (正式写手)

[求助] qPCR引物设计问题（急急急急急！） 已有1人参与

请求各位虫友的帮助：
本人即将要做qPCR—菌种定量的实验，我想的是针对目的菌株设计出特异性引物，其他杂菌不会扩增出相应的基因，请问要怎样设计这种类型的特异性引物呢，我看了很多硕博论文，还不是特别明白，希望虫友能够指点迷津，已经卡在这个点卡了一个多星期了，一直没有进展。
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2019-04-09 08:42:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ingoing

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 狂暴小子 at 2019-05-29 20:03:30
不好意思，我这块是做菌种定量的研究，用的是绝对定量法，内参基因应该是相对定量吧？...

好的吧，谢谢啦

发自小木虫Android客户端
回复此楼
9楼2019-05-29 21:04:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

美亿美生物

捐助贵宾 (职业作家)

技术服务-实验代做
哎，这个嘛，加油加油

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
2楼2019-04-09 09:25:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王艳xinwei

银虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
西门吹雪170: 金币+4, 鼓励回帖交流 2019-04-09 22:03:34
你可以查找该目的菌种相关文献，最好找到全基因组序列，可以找到该菌种某些基因序列的登陆号，从ncbi中得到全序列，再利用引物设计软件设计特异性引物，一般定量引物比较短，扩增前段200pb左右；如果没有公布的目的基因全长或前段，你可以找其他菌种具有公开的基因全长设计非特性引物，再对你的目的菌进行扩增，测序，比对等鉴定过程；另一种方法就是设计某一基因的引物，做race获得基因全长，再设计定量引物；最后另一种方法就是拿钱让试剂公司做该菌种的转录组测序，在获得的结果中找到你感兴趣的基因设计定量引物！以上方法仅供参考！

发自小木虫IOS客户端
赞一下(2人) 回复此楼
坚持就是胜利
3楼2019-04-09 09:47:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yipobing

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2019-05-29 22:54:35
首先，尽可能先确定你的模板（如果是混合菌的话）有哪些，尽可能从ncbi 或者ucsc 找到 RNA 序列，一般已发表或者已上传的数据知道菌株信息都能找到。确定这些你就能确定特异性部分了，然后设计引物，推荐一个好用的在线软件https://sg.idtdna.com/site/accou ... uest%2FHome%2FIndex
希望有帮助
赞一下 回复此楼
4楼2019-04-10 15:59:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料292调剂 +4 橘颂思美人 2026-03-23 4/200 2026-03-23 23:16 by peike
[考研] 384求调剂 +3 子系博 2026-03-22 6/300 2026-03-23 21:45 by 子系博
[考研] 306求调剂 +9 chuanzhu川烛 2026-03-18 9/450 2026-03-23 13:17 by luoyongfeng
[考研] 070300，一志愿北航320求调剂 +3 Jerry0216 2026-03-22 5/250 2026-03-23 09:16 by 。。堂堂
[考研] 一志愿东华大学化学070300，求调剂 +7 2117205181 2026-03-21 8/400 2026-03-22 22:55 by chixmc
[考研] 寻找调剂 +4 倔强芒? 2026-03-21 4/200 2026-03-22 16:14 by 木托莫露露
[考研] 275求调剂 +6 shansx 2026-03-22 8/400 2026-03-22 15:27 by barlinike
[考研] 297求调剂 +3 喜欢还是不甘心 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:33 by 学员8dgXkO
[考研] 266求调剂 +3 哇呼哼呼哼 2026-03-20 3/150 2026-03-21 16:46 by barlinike
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-20 7/350 2026-03-21 16:36 by barlinike
[考研] 265求调剂 +12 梁梁校校 2026-03-19 14/700 2026-03-21 13:38 by lature00
[考研] 求调剂 +6 Mqqqqqq 2026-03-19 6/300 2026-03-21 08:04 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 Ma_xt 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:05 by JourneyLucky
[考研] 中南大学化学学硕337求调剂 +3 niko- 2026-03-19 6/300 2026-03-20 21:58 by luoyongfeng
[考研] 295材料求调剂，一志愿武汉理工085601专硕 +5 Charlieyq 2026-03-19 5/250 2026-03-20 20:35 by JourneyLucky
[考研] 材料学求调剂 +4 Stella_Yao 2026-03-20 4/200 2026-03-20 20:28 by ms629
[考研] 086500 325 求调剂 +3 领带小熊 2026-03-19 3/150 2026-03-20 18:38 by 尽舜尧1
[考研] 0856调剂，是学校就去 +8 sllhht 2026-03-19 9/450 2026-03-20 14:25 by 无懈可击111
[考研] 320求调剂0856 +3 不想起名字112 2026-03-19 3/150 2026-03-19 22:53 by 学员8dgXkO
[考研] 生物学调剂招人！！！ +3 山海天岚 2026-03-17 4/200 2026-03-19 21:34 by 怎么释怀
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭