| 查看: 2148 | 回复: 8 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
qPCR引物设计问题（急急急急急！） 已有1人参与
|
|||
 请求各位虫友的帮助：本人即将要做qPCR—菌种定量的实验，我想的是针对目的菌株设计出特异性引物，其他杂菌不会扩增出相应的基因，请问要怎样设计这种类型的特异性引物呢，我看了很多硕博论文，还不是特别明白，希望虫友能够指点迷津，已经卡在这个点卡了一个多星期了，一直没有进展。 |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有54人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
王艳xinwei
银虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 534.2
- 散金: 10
- 帖子: 202
- 在线: 155.5小时
- 虫号: 963946
- 注册: 2010-03-07
- 专业: 学前教育学
★ ★ ★ ★
西门吹雪170: 金币+4, 鼓励回帖交流 2019-04-09 22:03:34
西门吹雪170: 金币+4, 鼓励回帖交流 2019-04-09 22:03:34
|
你可以查找该目的菌种相关文献，最好找到全基因组序列，可以找到该菌种某些基因序列的登陆号，从ncbi中得到全序列，再利用引物设计软件设计特异性引物，一般定量引物比较短，扩增前段200pb左右；如果没有公布的目的基因全长或前段，你可以找其他菌种具有公开的基因全长设计非特性引物，再对你的目的菌进行扩增，测序，比对等鉴定过程；另一种方法就是设计某一基因的引物，做race获得基因全长，再设计定量引物；最后另一种方法就是拿钱让试剂公司做该菌种的转录组测序，在获得的结果中找到你感兴趣的基因设计定量引物！以上方法仅供参考！ 发自小木虫IOS客户端 |
3楼2019-04-09 09:47:39
2楼2019-04-09 09:25:34
【答案】应助回帖
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2019-05-29 22:54:35
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2019-05-29 22:54:35
|
首先，尽可能先确定你的模板（如果是混合菌的话）有哪些，尽可能从ncbi 或者ucsc 找到 RNA 序列，一般已发表或者已上传的数据知道菌株信息都能找到。确定这些你就能确定特异性部分了，然后设计引物，推荐一个好用的在线软件https://sg.idtdna.com/site/accou ... uest%2FHome%2FIndex 希望有帮助 |
4楼2019-04-10 15:59:44
5楼2019-04-15 19:36:39
100