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我所总结的AFLP分子标记的要点
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现在仍然有很多实验室在做AFLP分子标记，但可能会遇到一些问题，主要是重复性不好，有时候能够扩出来，有时候扩不出来，再有就是跑聚丙烯的时候差异带可能是700bp，但回收后就变成了200多，也就是在聚丙烯板上看到的和回收的片段不一样打，对于这几个问题，现总结如下，希望对大家有所帮助，同时也希望同行们不吝赐教。 第一，所提取的基因组DNA必须保持完整，不断裂，还要经过纯化，除去蛋白，多糖，酚类及RNA等杂质，否则影响酶切效果。 第二，尽量用大公司生产的内切酶。 第三，接头让公司直接合成，尽量不要合成单链自己退火结合，大一点的公司如宝生物就能合成双链接头，只是稍贵了一点。 第四，如果跑非变性胶的话，直接点marker就行了，要是跑变性胶，扩增产物变性的同时，marker也要变性。 第五，要把每一次跑板都当成是能够跑出差异片段来做，尽最大努力做好每一天的实验。 如有不周之处，敬请指教！ |
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