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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助：请问如何进一步提高蛋白的溶解度
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

[交流] 求助：请问如何进一步提高蛋白的溶解度

我要表达的蛋白溶解度很低，换了好几个载体，都形成了包涵体，现在换用了PGEX-4T-1载体，蛋白微溶，请问如何进一步提高蛋白的溶解度？我的蛋白表达条件：12度，IPTG浓度0.1mM，诱导24小时，LB培养基
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Thank-you，so-blue.
1楼 2009-05-15 23:06:22
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anquren

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
susizheng(金币+1,VIP+0):谢谢 5-16 13:33
susizheng(金币+1,VIP+0): 5-16 14:50
susizheng(金币+1,VIP+0): 5-16 14:51
实在不行,只有改成突变体了
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2楼2009-05-16 08:35:34
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)
★
susizheng(金币+1,VIP+0):谢谢 5-16 13:34
试试融合表达
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3楼2009-05-16 09:09:17
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mimisikai

金虫 (小有名气)
★ ★
susizheng(金币+2,VIP+0):谢谢 5-16 13:34
1 试试融合表达
2 温度12度似乎不好，对菌很不利
3 若条件允许删去蛋白中一些不要的疏水蛋白，溶解性这么差很可能是膜蛋白吧，可以考虑把跨膜区删了
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4楼2009-05-16 10:14:18
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
引用回帖:
Originally posted by anquren at 2009-5-16 08:35:
实在不行,只有改成突变体了

我要的是完完全全野生型的蛋白质
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Thank-you，so-blue.
5楼2009-05-16 14:51:34
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
引用回帖:
Originally posted by mimisikai at 2009-5-16 10:14:
1 试试融合表达
2 温度12度似乎不好，对菌很不利
3 若条件允许删去蛋白中一些不要的疏水蛋白，溶解性这么差很可能是膜蛋白吧，可以考虑把跨膜区删了

2.考虑12度是因为温度低，蛋白合成慢，对包涵体的形成不利。
3.我的蛋白也不是膜蛋白
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Thank-you，so-blue.
6楼2009-05-16 14:55:46
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2009-5-16 14:55:

2.考虑12度是因为温度低，蛋白合成慢，对包涵体的形成不利。
3.我的蛋白也不是膜蛋白

1，我就是跟GST融合表达的，GST溶解性相当好。
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Thank-you，so-blue.
7楼2009-05-16 15:02:41
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
引用回帖:
Originally posted by mimisikai at 2009-5-16 10:14:
1 试试融合表达
2 温度12度似乎不好，对菌很不利
3 若条件允许删去蛋白中一些不要的疏水蛋白，溶解性这么差很可能是膜蛋白吧，可以考虑把跨膜区删了

1，我就是跟GST融合表达的，GST溶解性相当好
赞一下 回复此楼
Thank-you，so-blue.
8楼2009-05-16 15:04:06
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mimisikai

金虫 (小有名气)
★
susizheng(金币+1,VIP+0):谢谢 5-16 18:01
我没有见过你这么低的温度的 我试过最低的也就20度
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9楼2009-05-16 16:21:35
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fengyalan2

★
susizheng(金币+1,VIP+0):谢谢 5-16 18:00
用MBP标签，比GST增溶效果更佳！
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10楼2009-05-16 16:23:00
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