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蓝色基因

金虫 (正式写手)


susizheng(金币+1,VIP+0):谢谢 5-18 10:04
我们实验室15-25度之间表达,一般为20度过夜培养。
11楼2009-05-18 09:59:34
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lifefamily


susizheng(金币+1,VIP+0):谢谢交流 5-18 17:39
据我在生化所的了解,遇到包涵体多的蛋白,通常是融合蛋白+低温表达。
比如GST融合(楼主已经做了)下16°C过夜表达,再低就意义不大了。
另外,我们也用过一些除GST外其他的融合蛋白来帮助表达,比如Trx融合和GB1融合。
如果还是包涵体,那就只有再回头从序列入手,掐头去尾的剔除一些性质不好的序列,重新构建克隆。甚至分段表达,再体外连接。
12楼2009-05-18 17:16:53
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jqq1985

银虫 (正式写手)

培养温度高点,蛋白的溶解度也大点。
13楼2009-05-18 18:06:26
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baisuilan

金虫 (正式写手)

培养基里补加蔗糖、酒精等富营养化。
扩大培养液体积,OD值0.3就开始诱导。
14楼2009-05-18 19:06:03
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