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你是路人甲

铜虫 (小有名气)


[交流] 病毒转染HEPG2 细胞

最近我在用病毒载体做knockdown转染, 转染的细胞是HepG2. 首先,我用的是pLKO.1-TRC cloning vector. 然后用六孔板种上HepG2, 用不同的浓度puromycin去筛选细胞,得到致死所有细胞的最小浓度是3mg/ml. 于是开始转染。但是开始出现问题了,1)转然24小时后,细胞貌似比以前长得快多了,然后用puromycin去筛选,六天了死的很少,细胞在六孔板里都长满了,只好分开重新种,又用5mg/ml puromycin 去筛选,还是死的少,不久有长满了。Western Blotting 显示 没怎么敲掉,条带几乎一样粗。
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宇宙小妖怪

铁虫 (小有名气)


western 蛋白水平检测结果不好不代表qPCR基因水平检测也不好,楼主有没有用48h收细胞做qPCR基因水平检测,我们实验室用RFECT,SIRNA技术转染后首选48h收细胞做qPCR基因水平检测,希望能帮到楼主
5楼2019-04-03 16:28:40
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