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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 病毒转染HEPG2 细胞
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你是路人甲

铜虫 (小有名气)

[交流] 病毒转染HEPG2 细胞

最近我在用病毒载体做knockdown转染， 转染的细胞是HepG2. 首先，我用的是pLKO.1-TRC cloning vector. 然后用六孔板种上HepG2, 用不同的浓度puromycin去筛选细胞，得到致死所有细胞的最小浓度是3mg/ml. 于是开始转染。但是开始出现问题了，1）转然24小时后，细胞貌似比以前长得快多了，然后用puromycin去筛选，六天了死的很少，细胞在六孔板里都长满了，只好分开重新种，又用5mg/ml puromycin 去筛选，还是死的少，不久有长满了。Western Blotting 显示 没怎么敲掉，条带几乎一样粗。
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1楼 2019-04-03 09:01:25
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宇宙小妖怪

铁虫 (小有名气)
western 蛋白水平检测结果不好不代表qPCR基因水平检测也不好，楼主有没有用48h收细胞做qPCR基因水平检测，我们实验室用RFECT,SIRNA技术转染后首选48h收细胞做qPCR基因水平检测，希望能帮到楼主
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5楼2019-04-03 16:28:40
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miaojiabing2楼
2019-04-03 10:57   回复  
你是路人甲(金币+1): 谢谢参与
youngen3楼
2019-04-03 15:02   回复  
你是路人甲(金币+1): 谢谢参与
youngen4楼
2019-04-03 15:02   回复  
tzynew6楼
2019-04-04 18:49   回复  
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nono20097楼
2019-04-06 17:03   回复  
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·
sz_kebaoyuan8楼
2019-04-08 08:53   回复  
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