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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 大肠杆菌不表达外源蛋白
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wuliang23

金虫 (小有名气)

[求助] 大肠杆菌不表达外源蛋白 已有1人参与

将目的基因导入bl21，发现目的蛋白未表达，或者是表达量很低。用的16摄氏度 0.4mMIPTG诱导。之前也试过不同浓度梯度0.1-0.4mMIPTG结果一样，sds无明显目的条带，wb无目的条带。测序表明启动子和序列都对，为什么还是有这种现象，求大神解答，郁闷死了

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1楼 2019-03-26 20:10:35
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ideacolin

新虫 (初入文坛)
用rosetta菌株，37度诱导6小时看看

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2楼2019-03-27 13:29:27
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wuliang23

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ideacolin at 2019-03-27 13:29:27
用rosetta菌株，37度诱导6小时看看

我已经在试了，看看结果怎么样

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3楼2019-03-27 16:12:13
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tq0ax1r

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-03-30 23:03:13
如果是大肠杆菌表达真核细胞蛋白，除了用rosetta之外，同时还可以尝试用m9 minimum media。我就碰到过这种情况，rosetta在rich media里不表达，在minimum media里出现目的条带的。记得要保持低温表达
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4楼2019-03-30 11:18:39
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555weiteng

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by tq0ax1r at 2019-03-30 11:18:39
如果是大肠杆菌表达真核细胞蛋白，除了用rosetta之外，同时还可以尝试用m9 minimum media。我就碰到过这种情况，rosetta在rich media里不表达，在minimum media里出现目的条带的。记得要保持低温表达

您好，目前我也是表达不出来蛋白，是否可以说下您的 rich media, minimum media，比较下培养基的区别。
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5楼2019-05-13 09:16:46
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