24小时热门版块排行榜    

查看: 391  |  回复: 6
当前主题已经存档。

yuhuimeiye

木虫 (著名写手)

[交流] 大片段基因扩增求助

要调取的目的基因比较大,有3100bp,取动物细胞和组织分别提取RNA,检测RNA质量还可以,反转录用的fermentas的酶,反应条件为室温十分钟,42度一小时,冰上两分钟。然后进行PCR,一条带都没有,我将目的基因设计了3对引物,分3段扩增,也没有结果,做嵌式都没有结果。麻烦大家帮忙分析一下原因。谢谢

[ Last edited by yuhuimeiye on 2009-5-14 at 11:38 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

大海一孤舟

铜虫 (小有名气)

你的实验操作我不是很清楚。如果pcr什么条带都没有。
1.在pcr条件上面有问题
2.你的试剂配比有问题,这个问题我曾今遇到过的。
3.就是pcr的聚合酶没有活性了
4.引物合成的有问题,或者加入的量有问题,因为即使没有模板,在正常情况下也是有一些自连现象的。
2楼2009-05-14 12:31:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuhuimeiye

木虫 (著名写手)

PCR应该没有问题,几个实验室的同学都帮我用他们实验室的东西做了,一样的结果,也不可能是酶的问题,我换了好几批。我在想是不是反转录没有调出来那么长的cDNA
3楼2009-05-14 13:32:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaocy8903

木虫 (知名作家)

反转录。
4楼2009-05-14 15:19:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sgba0307

铁虫 (小有名气)

不是很懂!~
5楼2009-05-14 19:30:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hulqi

金虫 (正式写手)

你RNA质量检测可以的话,那就是反转录那一步出了问题,你反转录是用的试剂盒不?一般RNA出来了,cDNA问题不是很大的。是做RT的吗?
6楼2009-05-15 00:31:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuhuimeiye

木虫 (著名写手)

RNA的浓度能达到2000,OD能达到1.9左右。电泳我也看了,只是5s的比较亮。RT不是用的试剂盒。用的fermentas的,他和promega的相比哪个好点呢,谢谢
7楼2009-05-15 07:31:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yuhuimeiye 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 285求调剂 +6 满头大汗的学生 2026-02-28 6/300 2026-03-01 06:29 by Trying]
[考研] 材料调剂 +4 爱擦汗的可乐冰 2026-02-28 4/200 2026-03-01 00:38 by 猫猫球alter
[基金申请] 面上模板改不了页边距吧? +5 ieewxg 2026-02-25 6/300 2026-03-01 00:10 by addressing
[考研] 307求调剂 +4 73372112 2026-02-28 6/300 2026-03-01 00:04 by ll247
[考研] 304求调剂 +3 52hz~~ 2026-02-28 5/250 2026-03-01 00:00 by 52hz~~
[考研] 317一志愿华南理工电气工程求调剂 +5 Soliloquy_Q 2026-02-28 8/400 2026-02-28 23:36 by xyx2012xyx
[考研] 290求调剂 +5 材料专硕调剂; 2026-02-28 6/300 2026-02-28 21:40 by gaoxiaoniuma
[考研] 295求调剂 +5 19171856320 2026-02-28 5/250 2026-02-28 21:39 by gaoxiaoniuma
[考研] 材料学调剂 +5 提神豆沙包 2026-02-28 5/250 2026-02-28 21:34 by gaoxiaoniuma
[考研] 264求调剂 +3 巴拉巴拉根556 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:31 by gaoxiaoniuma
[考研] 311求调剂 +8 南迦720 2026-02-28 8/400 2026-02-28 21:30 by gaoxiaoniuma
[考研] 材料类求调剂 +6 wana_kiko 2026-02-28 6/300 2026-02-28 21:20 by gaoxiaoniuma
[考研] 284求调剂 +4 天下熯 2026-02-28 4/200 2026-02-28 21:13 by gaoxiaoniuma
[考研] 高分子化学与物理调剂 +4 好好好1233 2026-02-28 7/350 2026-02-28 20:42 by 好好好1233
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +8 吃宵夜1 2026-02-28 10/500 2026-02-28 20:27 by L135790
[考研] 298求调剂 +8 人间唯你是清欢 2026-02-28 11/550 2026-02-28 20:26 by L135790
[考研] 276求调剂 +3 路lyh123 2026-02-28 4/200 2026-02-28 19:45 by 路lyh123
[高分子] 求环氧树脂研发1名 +3 孙xc 2026-02-25 11/550 2026-02-28 16:57 by ichall
[考研] 265分求调剂不调专业和学校有行学上就 +4 礼堂丁真258 2026-02-28 6/300 2026-02-28 16:18 by 求调剂zz
[考研] 304求调剂 +5 曼殊2266 2026-02-28 6/300 2026-02-28 12:44 by 迷糊CCPs
信息提示
请填处理意见