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载体连接转化,单菌落摇不起来,求大神指点! 已有1人参与
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自己做的载体连接,Pet28a先酶切以后,连接目的片段。转化至DH5α里面,涂LB平板(加卡那霉素),两天才长出来几十个小点点,大的菌落不超过10个。 挑取大的单菌落,接种至LB液体培养基里,37℃摇了一夜加一天,培养基还是澄清的。第一次做构建载体,懵逼的很,希望大神指点~ 发自小木虫Android客户端 |
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2楼2019-03-20 14:45:29
3楼2019-03-20 14:47:34
送红花一朵 |
对的,我摇菌3天长出来OD值不到0.4,拿菌液破碎后为模板,做PCR,然后出现一个条带为600bp左右,也不是插入的片段长度(插入片段为510bp),正常的话用通用引物p出的条带应该为800—1000bp左右。严重怀疑载体连接失败,可是失败了怎么能长出菌呢? 发自小木虫Android客户端 |
4楼2019-03-22 19:44:16













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