应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 载体连接转化，单菌落摇不起来，求大神指点！
51/1返回列表
查看: 1443  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

骆驼和小丫头

新虫 (初入文坛)

[求助] 载体连接转化，单菌落摇不起来，求大神指点！ 已有1人参与

自己做的载体连接，Pet28a先酶切以后，连接目的片段。转化至DH5α里面，涂LB平板（加卡那霉素），两天才长出来几十个小点点，大的菌落不超过10个。
挑取大的单菌落，接种至LB液体培养基里，37℃摇了一夜加一天，培养基还是澄清的。第一次做构建载体，懵逼的很，希望大神指点～

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2019-03-20 14:24:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

本帖仅楼主可见
赞一下
5楼2019-03-22 20:39:34
已阅   申请MicEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页
查看全部 6 个回答

匿名

本帖仅楼主可见
赞一下
2楼2019-03-20 14:45:29
已阅   申请MicEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

匿名

感谢参与，应助指数 +1
本帖仅楼主可见
赞一下

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

骆驼和小丫头
3楼2019-03-20 14:47:34
已阅   申请MicEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

骆驼和小丫头

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by 立林258369 at 2019-03-20 14:47:34
建议先做菌落PCR ，再去摇菌，这样可以省很多的事，同时挑菌落务必保证是单菌落。
你应该是在做原核表达，用的his 标签

对的，我摇菌3天长出来OD值不到0.4，拿菌液破碎后为模板，做PCR，然后出现一个条带为600bp左右，也不是插入的片段长度（插入片段为510bp），正常的话用通用引物p出的条带应该为800—1000bp左右。严重怀疑载体连接失败，可是失败了怎么能长出菌呢？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2019-03-22 19:44:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 302求调剂 +6 负心者当诛 2026-03-11 6/300 2026-03-13 16:11 by JourneyLucky
[考研] 材料化工求调剂 +8 博斯特525 2026-03-06 9/450 2026-03-13 15:57 by chixmc
[考研] 工科材料085601 279求调剂 +8 困于星晨 2026-03-12 10/500 2026-03-13 15:42 by ms629
[考研] 285求调剂 +5 柴郡猫_ 2026-03-12 5/250 2026-03-13 14:56 by vgtyfty
[考研] 085600材料与化工 309分请求调剂 +7 dtdxzxx 2026-03-12 8/400 2026-03-13 14:43 by jxchenghu
[考研] 26调剂/材料科学与工程/总分295/求收留 +8 2026调剂侠 2026-03-12 8/400 2026-03-13 13:21 by JourneyLucky
[考研] 0703一志愿211 285分求调剂 +4 ly3471z 2026-03-13 4/200 2026-03-13 13:00 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 资源与环境 285 +3 未名考生 2026-03-10 3/150 2026-03-13 10:31 by houyaoxu
[考研] 工科0856专硕化学工程269能调剂吗 +10 我想读研11 2026-03-10 10/500 2026-03-13 10:14 by Yuyi.
[考研] 270求调剂 085600材料与化工专硕 +3 YXCT 2026-03-11 3/150 2026-03-13 10:13 by houyaoxu
[考研] 341求调剂 +4 捣蛋猪猪 2026-03-11 4/200 2026-03-12 14:47 by ruiyingmiao
[考研] 标题:捡漏预警|08工科/09农学调剂!英语要求低，过线即有机会! +9 马超放烟花 2026-03-07 15/750 2026-03-12 14:07 by 马超放烟花
[考研] 293求调剂，一志愿陕师大生物学 +3 ??????.?.??? 2026-03-09 3/150 2026-03-11 10:02 by 学员8dgXkO
[考研] 307求调剂 +6 超级伊昂大王 2026-03-10 6/300 2026-03-10 22:46 by 星空星月
[考研] 一志愿湖师大化学289求调剂 +5 XMCMM3.14159 2026-03-10 5/250 2026-03-10 15:41 by shangxh
[考研] 0817一志愿苏州大学280复试调剂 +9 kk扛 2026-03-07 9/450 2026-03-10 14:20 by peike
[考研] 313求调剂 +4 Yyt杨1 2026-03-07 5/250 2026-03-09 13:48 by macy2011
[考研] 求调剂，数一英一274分 +4 小菲会努力 2026-03-08 4/200 2026-03-09 12:40 by 一定上岸哟_
[考研] 材料调剂 +4 xxxcm 2026-03-08 7/350 2026-03-09 10:11 by EBSD
[考研] 0856材料与化工290求调剂 +7 Nebulala 2026-03-08 8/400 2026-03-09 05:25 by houyaoxu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭