应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 载体连接转化，单菌落摇不起来，求大神指点！
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
61/1返回列表
查看: 1475  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

骆驼和小丫头

新虫 (初入文坛)

[求助] 载体连接转化，单菌落摇不起来，求大神指点！ 已有1人参与

自己做的载体连接，Pet28a先酶切以后，连接目的片段。转化至DH5α里面，涂LB平板（加卡那霉素），两天才长出来几十个小点点，大的菌落不超过10个。
挑取大的单菌落，接种至LB液体培养基里，37℃摇了一夜加一天，培养基还是澄清的。第一次做构建载体，懵逼的很，希望大神指点～

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2019-03-20 14:24:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

本帖仅楼主可见
赞一下
2楼2019-03-20 14:45:29
已阅   申请MicEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

匿名

感谢参与，应助指数 +1
本帖仅楼主可见
赞一下

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

骆驼和小丫头
3楼2019-03-20 14:47:34
已阅   申请MicEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

骆驼和小丫头

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by 立林258369 at 2019-03-20 14:47:34
建议先做菌落PCR ，再去摇菌，这样可以省很多的事，同时挑菌落务必保证是单菌落。
你应该是在做原核表达，用的his 标签

对的，我摇菌3天长出来OD值不到0.4，拿菌液破碎后为模板，做PCR，然后出现一个条带为600bp左右，也不是插入的片段长度（插入片段为510bp），正常的话用通用引物p出的条带应该为800—1000bp左右。严重怀疑载体连接失败，可是失败了怎么能长出菌呢？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2019-03-22 19:44:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

本帖仅楼主可见
赞一下
5楼2019-03-22 20:39:34
已阅   申请MicEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

匿名

本帖仅楼主可见
赞一下
6楼2019-03-22 20:40:39
已阅   申请MicEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页
相关版块跳转 我要订阅楼主 骆驼和小丫头 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 复试调剂 +5 asdasdassda 2026-04-05 5/250 2026-04-06 09:32 by dongzh2009
[考研] 材料调剂 +10 一样YWY 2026-04-05 11/550 2026-04-06 09:29 by guanxin1001
[考研] 调剂 一志愿吉林大学357分 +5 .Starry. 2026-04-04 5/250 2026-04-06 09:28 by cql1109
[考研] 一志愿北交大材料工程总分358求调剂 +6 cs0106 2026-04-05 6/300 2026-04-06 08:48 by jj987
[考研] 材料调剂 +14 壹贰贰亿 2026-04-04 14/700 2026-04-05 23:31 by 来看流星雨10
[考研] 294求调剂 +4 Grey_Ey 2026-04-01 5/250 2026-04-05 23:05 by Grey_Ey
[考研] 316求调剂 +5 yyx想调剂 2026-04-05 5/250 2026-04-05 22:22 by 咔咔咔咔9
[考研] 283求调剂 +5 baiiyu 2026-04-05 6/300 2026-04-05 20:35 by 啵啵啵0119
[考研] 0860 求调剂 一志愿国科大 348 分 +3 WiiiP 2026-04-03 3/150 2026-04-05 17:43 by Ecowxq666！
[考研] 085600调剂 +9 东照照照 2026-04-04 9/450 2026-04-05 13:44 by ujn_zhuj
[考研] 工科08专硕机械275求调剂 +3 AaAa7420 2026-04-02 3/150 2026-04-05 13:26 by jp9609
[考研] 材料调剂 +11 一样YWY 2026-04-02 13/650 2026-04-04 23:10 by 无际的草原
[考研] 可跨专业调剂 +3 周的得地 2026-04-04 6/300 2026-04-04 22:21 by barlinike
[考研] 材料专业383求调剂 +8 郭阳阳阳成 2026-04-03 8/400 2026-04-04 10:29 by Rednal.
[考研] 化工调剂303分，过四级 +28 栖梧待风 2026-04-02 28/1400 2026-04-03 21:40 by qlm5820
[考研] 数二英二348求调剂 +4 hxdzj1 2026-04-03 5/250 2026-04-03 21:25 by zhq0425
[考研] 293求调剂 +5 末未mm 2026-04-02 6/300 2026-04-03 15:20 by 王保杰33
[考研] 建环，能源，土木老师路过看一看！！！ +5 嘿嘿uu 2026-04-01 5/250 2026-04-03 11:47 by znian
[考研] 求调剂！生物与医药专硕 +4 逆转陆先生 2026-04-01 5/250 2026-04-03 08:33 by Jaylen.
[考研] 0855机械初试280求调剂 +3 kazenotori 2026-03-31 3/150 2026-04-01 10:08 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭