应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 载体连接转化，单菌落摇不起来，求大神指点！
61/1返回列表
查看: 1556  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

骆驼和小丫头

新虫 (初入文坛)

[求助] 载体连接转化，单菌落摇不起来，求大神指点！ 已有1人参与

自己做的载体连接，Pet28a先酶切以后，连接目的片段。转化至DH5α里面，涂LB平板（加卡那霉素），两天才长出来几十个小点点，大的菌落不超过10个。
挑取大的单菌落，接种至LB液体培养基里，37℃摇了一夜加一天，培养基还是澄清的。第一次做构建载体，懵逼的很，希望大神指点～

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2019-03-20 14:24:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

本帖仅楼主可见
赞一下
2楼2019-03-20 14:45:29
已阅   申请MicEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

匿名

感谢参与，应助指数 +1
本帖仅楼主可见
赞一下

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

骆驼和小丫头
3楼2019-03-20 14:47:34
已阅   申请MicEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

骆驼和小丫头

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by 立林258369 at 2019-03-20 14:47:34
建议先做菌落PCR ，再去摇菌，这样可以省很多的事，同时挑菌落务必保证是单菌落。
你应该是在做原核表达，用的his 标签

对的，我摇菌3天长出来OD值不到0.4，拿菌液破碎后为模板，做PCR，然后出现一个条带为600bp左右，也不是插入的片段长度（插入片段为510bp），正常的话用通用引物p出的条带应该为800—1000bp左右。严重怀疑载体连接失败，可是失败了怎么能长出菌呢？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2019-03-22 19:44:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

本帖仅楼主可见
赞一下
5楼2019-03-22 20:39:34
已阅   申请MicEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

匿名

本帖仅楼主可见
赞一下
6楼2019-03-22 20:40:39
已阅   申请MicEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页
相关版块跳转 我要订阅楼主 骆驼和小丫头 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 c8fjyc45my 2026-06-05 6/300 2026-06-07 12:25 by rcch43i39g
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 c8fjyc45my 2026-06-05 5/250 2026-06-07 10:44 by rcch43i39g
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 c8fjyc45my 2026-06-05 7/350 2026-06-07 10:26 by rcch43i39g
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 c8fjyc45my 2026-06-05 7/350 2026-06-07 10:26 by rcch43i39g
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 c8fjyc45my 2026-06-05 8/400 2026-06-07 10:20 by rcch43i39g
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 c8fjyc45my 2026-06-05 7/350 2026-06-07 10:20 by rcch43i39g
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 c8fjyc45my 2026-06-05 6/300 2026-06-07 10:20 by rcch43i39g
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 c8fjyc45my 2026-06-05 4/200 2026-06-07 10:12 by rcch43i39g
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 c8fjyc45my 2026-06-05 7/350 2026-06-07 10:09 by rcch43i39g
[考博] 不知道还有没有招博士的学校了 +3 冻雨天 2026-06-04 4/200 2026-06-07 06:44 by oooqiao
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 oko5baaf5j 2026-06-05 6/300 2026-06-07 05:25 by rcch43i39g
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 c8fjyc45my 2026-06-05 6/300 2026-06-07 05:05 by rcch43i39g
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 c8fjyc45my 2026-06-05 6/300 2026-06-07 05:04 by rcch43i39g
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 c8fjyc45my 2026-06-05 7/350 2026-06-07 04:40 by rcch43i39g
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 c8fjyc45my 2026-06-05 5/250 2026-06-07 04:04 by rcch43i39g
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 t7ptwec48b 2026-06-05 6/300 2026-06-07 03:45 by rcch43i39g
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 c8fjyc45my 2026-06-05 3/150 2026-06-06 21:43 by rcch43i39g
[论文投稿] 你们遇到过吗 +8 小lee同学 2026-06-02 8/400 2026-06-06 07:56 by 六两废铜
[论文投稿] 关于水星近日点进动成因的质疑 与实证分析 +4 yjqwhwc3159 2026-06-04 9/450 2026-06-04 23:41 by yjqwhwc3159
[文学芳草园] 婚姻里的赢家 +3 myrtle 2026-06-02 6/300 2026-06-04 23:17 by myrtle
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭