24小时热门版块排行榜

>论坛更新日志 (3280)
>虫友互识 (848)
>文献求助 (235)
>导师招生 (162)
>休闲灌水 (159)
>考博 (131)
>教师之家 (86)
>博后之家 (81)
>硕博家园 (80)
>找工作 (77)
>论文投稿 (75)
>论文道贺祈福 (67)
>基金申请 (65)
>考研 (57)
>公派出国 (51)
>招聘信息布告栏 (36)

返回列表

当前主题已经存档。

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

yjc8183

铁杆木虫 (著名写手)

应助: 4 (幼儿园)
金币: 8854.5
散金: 102
帖子: 1823
在线: 125.1小时
虫号: 521659
注册: 2008-03-09
性别: GG
专业: 中药制剂

[交流] 请问：用什么方法测定蛋白含量？

RT，近来计划测定一下动物组织的蛋白含量，查了下资料，有用普通分光光度计的，有用酶标仪的。这两者到底有没有差别，区别在哪里，希望思考过此问题并用过的大侠解答一下，顺便说说注意点。
另外，测定所用试剂也有很多种：BCA、lowry 法（folin 酚试剂法）、Bradford 法（考马斯亮蓝染色法），尽管看了许多文献，还是拿不定注意，请用过的虫友叙说一二，再次小虫多谢了！
没有用过的或者搜索出来结果的，在此谢谢你，就不要回答了。

回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

污水处理

我的新领域

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

征婚家穷人丑，一米四九。小学文化，农村户口。破屋三间，薄田一亩。开门睡觉，治安靠狗。冷锅热灶，老婆没有。一年四季，药不离口。今日上网，广征女友。革命路

1楼 2009-05-13 15:50:03

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

圆头

金虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 874.3
帖子: 154
在线: 19.9小时
虫号: 717317
注册: 2009-03-07
专业: 生物化学

1、Folin－酚试剂法（Lowry法）:灵敏度高(～5mg),原理是双缩脲反应,磷钼酸－磷钨酸试剂被Tyr和Phe还原,干扰物质有硫酸铵、Tris缓冲液、甘氨酸、各种硫醇.需时50分钟左右。具体方法见《药典》第三部。检测重现性好。主要蛋白质产品的定量检测。现在有商品的Folin试剂（Bio-Rad等公司)，不用实验室自己配制，克服了此方法的一大缺点。生化生物药品的质量标准中的蛋白定量大都用此法。

2、考马斯亮蓝法(Bradford法):1976年由Bradford建立。灵敏度最高(1mg),比Lowry法灵敏约4倍。原理是考马斯亮蓝G-250与蛋白质(主要是与蛋白质中的碱性氨基酸特别是精氨酸和芳香族氨基酸残基)结合时，其最大吸收由465nm变为595nm。干扰物质有强碱性缓冲液、TritonX-100、SDS。需时20分钟左右。目前科研单位、高校普遍用此法，我感觉稳定性比Lowry法差一些。

3、凯氏定氮法（Kjedahl法）：最精典的蛋白含量测定方法，操作步骤多，复杂，要求的技术也较高一些。将蛋白氮转化为氨，用酸吸收后滴定，计算氮量，蛋白氮乘以6.25即推算出蛋白质含量。不少生化药用此法定氮或测蛋白含量。

4、紫外吸收法：原理是蛋白质分子中，酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键，使蛋白质具有吸收紫外光的性质。吸收高峰在280nm处，其吸光度（即光密度值）与蛋白质含量成正比。此外，蛋白质溶液在238nm的光吸收值与肽键含量成正比。简便、灵敏、快速，不消耗样品，测定后仍能回收使用。准确度较差，干扰物质多，在用标准曲线法测定蛋白质含量时，对那些与标准蛋白质中酪氨酸和色氨酸含量差异大的蛋白质，有一定的误差。特别适用于柱层析洗脱液的快速连续检测，因为此时只需测定蛋白质浓度的变化，而不需知道其绝对值。测定时，将待测蛋白质溶液倒入石英比色皿中，用配制蛋白质溶液的溶剂（水或缓冲液）作空白对照，在紫外分光度计上直接读取280nm的吸光度值OD280。蛋白质浓度可控制在0.1～1.0mg/ml左右。通常用1cm光径的标准石英比色皿，盛有浓度为1mg/ml的蛋白质溶液时，OD280约为1.0左右。由此可立即计算出蛋白质的大致浓度。

5、双缩脲法（Biuret法）：灵敏度低(1～10mg)，原理是多肽键＋碱性Cu2＋®紫色络合物，用于快速测定，但不太灵敏；准确度低一些。

6、总蛋白定量分析－BCA（Bicinchoninic acid，二辛可宁酸、二羧基二喹啉）：BCA试剂的蛋白质测定范围是20－2000μg/ml，45分钟内完成测定。原理是碱性条件下，蛋白将Cu2+还原为Cu+， Cu+与BCA试剂形成紫颜色的络合物，测定其在562nm处的吸收值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。