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yjc8183

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 请问:用什么方法测定蛋白含量?

RT,近来计划测定一下动物组织的蛋白含量,查了下资料,有用普通分光光度计的,有用酶标仪的。这两者到底有没有差别,区别在哪里,希望思考过此问题并用过的大侠解答一下,顺便说说注意点。
另外,测定所用试剂也有很多种:BCA、lowry 法(folin 酚试剂法)、Bradford 法(考马斯亮蓝染色法),尽管看了许多文献,还是拿不定注意,请用过的虫友叙说一二,再次小虫多谢了!
没有用过的或者搜索出来结果的,在此谢谢你,就不要回答了。
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w.king124

金虫 (正式写手)



yjc8183(金币+1,VIP+0):谢谢! 5-14 13:23
lowry 法和Bradford 法测定的范围不一样,只有在测定范围内蛋白质含量才和吸光度成正比,Bradford测量范围相对大一些,如果蛋白含量比较高的话,建议用Bradford。但是,配制溶液比较麻烦,而且很容易污染。
看好多国外的文献(植物),都是用的BCA法
7楼2009-05-14 12:59:20
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fxl530

木虫 (小有名气)


yjc8183(金币+1,VIP+0):非常感谢!请问酶标仪和分光光度计测定结果如何?如重复性、灵敏度等。 5-13 16:16
分光光度计和酶标仪没有区别的,酶标仪主要是一次可以测定多个样品,直接在酶标板中测定的。
lowry跟Brandford都可以,或者直接买试剂盒测定。Brandford法记得考马斯亮蓝一定是要过滤的否则根本不能用,切记。要注意的也就这个,其他的就直接照着方法做就行了。
2楼2009-05-13 16:07:41
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2die2005

金虫 (正式写手)


yjc8183(金币+1,VIP+0):谢谢,你们也是用分光光度计吗?我的量很少的,呵呵 5-13 16:18
我们实验室都是用的lowry法,貌似还不错的。PS:我们实验室都是做藻类的,所以基本上用的都是这个方法。
3楼2009-05-13 16:15:38
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guoxingjun2008

金虫 (正式写手)

Brandford法可以!
4楼2009-05-13 16:22:08
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