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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 求助
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18341841548

新虫 (小有名气)
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我想问大家一下，我现在做蛋白纯化，细胞破壁液是有活性的，并且很大，现在纯化的蛋白没有活性，考虑是咪唑抑制酶活，但是我超滤除去咪唑，顺带浓缩，酶活有了一点点，但是很小，请问大家知道什么原因嘛？哪里除了问题？非常感谢

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1楼 2019-03-16 09:22:50
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applesz

新虫 (小有名气)
纯化温度过高？

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7楼2019-03-16 09:35:18
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18341841548

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by applesz at 2019-03-16 09:35:18
纯化温度过高？

首先SDS_PAGE检测纯化的蛋白浓度还是挺大的，我确实是在室温下纯化的，如果蛋白胶图纯化蛋白浓度挺大，这种情况也要考虑温度的原因导致失活嘛？我自己认为应该不会这么快

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8楼2019-03-16 09:41:44
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applesz

新虫 (小有名气)
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8楼: Originally posted by 18341841548 at 2019-03-16 09:41:44
首先SDS_PAGE检测纯化的蛋白浓度还是挺大的，我确实是在室温下纯化的，如果蛋白胶图纯化蛋白浓度挺大，这种情况也要考虑温度的原因导致失活嘛？我自己认为应该不会这么快
...

酶失去活性与蛋白浓度没有太大的关联吧，酶活中心结构发生变化也有可能会导致酶失活吧。个人觉得温度是一个可能的因素，温度不同，可能酶所处的构象不一样，但不知道会不会适合你的体系，纯化的时候加点蛋白酶抑制剂。

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9楼2019-03-16 11:23:20
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18341841548

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by applesz at 2019-03-16 11:23:20
酶失去活性与蛋白浓度没有太大的关联吧，酶活中心结构发生变化也有可能会导致酶失活吧。个人觉得温度是一个可能的因素，温度不同，可能酶所处的构象不一样，但不知道会不会适合你的体系，纯化的时候加点蛋白酶抑制 ...

好的  非常感谢您的建议 第一次接触这方面实验  很多细节想不到  但是我的出发点 必须这个酶得有活性

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10楼2019-03-16 13:46:05
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8219524664楼
2019-03-16 09:30   回复  
18341841548(金币+1): 谢谢参与
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hdchina20102楼
2019-03-16 09:23   回复  
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飞翔之翼986楼
2019-03-16 09:32   回复  
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zxp3826332405楼
2019-03-16 09:31   回复  
18341841548(金币+1): 谢谢参与
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zfpd27663楼
2019-03-16 09:29   回复  
18341841548(金币+1): 谢谢参与
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