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mosaki

铜虫 (初入文坛)

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[求助] PCR如何入门已有3人参与

大家好，小木虫小白上来发帖，求助各位大神。
我是学中药的，没有生物基础，最近因为接到项目开始做植物DNA提取，PCR反应和酶切再跑胶，跑出来的胶真是一塌糊涂，求问各位，有什么书/刊物/方法能够自学提升PCR和跑胶水平？

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1楼 2019-03-13 15:19:57

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cry_2013

木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

PCR这个说简单也简单，说复杂也挺复杂的，我没有专门学过PCR相关知识，做的也就是普通PCR，遇到问题也是从网上查查相关原因（其实也没遇到过太大的问题。。。。。。），不过入门的话我觉得你应该先查一下PCR原理，知道PCR是什么，也就知道每一步的意义了，然后就是模板、引物设计、扩增程序这一块吧，模板这块现在的试剂盒感觉都不太差，按说明书操作一般问题都不大的（制备模板样本太刁难除外啊），引物的话网上也有很多引物设计的方法和注意事项，我觉得模板质量没问题，引物只要二聚体，错配什么的不要太过分（主要是3'端尽量不要有错配），一般都没问题的，扩增程序这块，你用的酶说明书上都有参考程序的，退火温度我觉小范围内变化对扩增结果影响不会太大，另外延伸的时间一定要够啊，别说明书1000-2000bp/min就按2000走了，时间稍微宽裕点。另外跑胶不太好，如果是根本没扩出条带就算了，如果marker都没跑好，那肯定就是胶的问题了。我觉得PCR这个多做几次，遇到问题解决问题，慢慢就有经验了。不过楼主专门找PCR相关的书籍去学习挺好的，我也想过看书的，最终没看下去