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jishanfan

金虫 (初入文坛)

[求助] C-Ag-C的DNA错配,能进行电泳实验吗?有谁做过吗?

“silver ions-mediated conformational switch: facile design of structure-controllable nucleic acid probes”在这篇论文中,利用了基于银离子的C-C错配方法,构造了一个检测银离子的分子信标,我特别感兴趣,想利用电泳的方法复现一下实验,我设计了两条DNA单链:

      D1:5'-TATCTCCACTCTACCAAT-3'
      D2:5'-ATTCCTACACTCCACATA-3'

buffer我用的是10mM的MOPS,硝酸镁15mM,硝酸银0-5微摩(梯度实验),EDTA Na2 1mM

两条DNA链溶解在20微升的buffer里面,浓度各为1微摩

实验方法,先将样品在90度保持10min,再以每分钟0.5度的速率降温,降到15度,然后保持1h,然后在12%的PAGE胶中进行电泳实验,电压70V,电泳2h,用stains-all染色剂进行染色处理,却只在胶片上看到了单链的染色道,没看到双链的染色道,之后换了好几组DNA序列,发现是同样的情况,所以我现在很疑惑,是我的实验方法出现了问题还是,序列,药品用量出现了问题。

我特别希望您能给我一些实验的建议和指导,如果您能在百忙之中,抽时间回复我的邮件,我将不胜感激,不胜荣幸!

我的邮箱:2295315930@qq.com
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