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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 载体验证
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时光fade

铜虫 (初入文坛)

[求助] 载体验证已有2人参与

求助大神~
刚来实验室，导师说之前留了一个重组载体，已经很长时间了，让我验证下，想问下该怎么验证？
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1楼2019-03-11 09:37:50
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lizimu566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
酶切验证或者测序验证
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2楼2019-03-11 11:41:53
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时光fade

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lizimu566 at 2019-03-11 11:41:53
酶切验证或者测序验证

据之前留下的信息，这个载体内有两个目的基因，是不是酶切之后有这两个目的条带就验证了？
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3楼2019-03-11 15:28:50
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macgray1

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
根据载体图谱，利用现有的内切酶，进行酶切验证，当然最好是把MCS区域测序验证一下，这样最保险了
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4楼2019-03-12 09:43:07
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时光fade

铜虫 (初入文坛)
谢谢
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5楼2019-03-12 09:55:07
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好运连连OK

新虫 (小有名气)
最好测序验证一下，用载体上的通用引物测个序，和你导师构建的时候的结果比对一下，完全一致就没问题

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6楼2019-03-12 09:55:37
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lizimu566

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 时光fade at 2019-03-11 15:28:50
据之前留下的信息，这个载体内有两个目的基因，是不是酶切之后有这两个目的条带就验证了？...

片段大小一致，一般就可以，最好是测序验证一下。
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7楼2019-03-12 11:12:56
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时光fade

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 好运连连OK at 2019-03-12 09:55:37
最好测序验证一下，用载体上的通用引物测个序，和你导师构建的时候的结果比对一下，完全一致就没问题

谢谢答主，我在郑州这边
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8楼2019-03-14 17:41:34
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时光fade

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by lizimu566 at 2019-03-12 11:12:56
片段大小一致，一般就可以，最好是测序验证一下。...

谢谢。
另外还想再问一个问题，之前留下的载体是已经转到农杆菌里面的，我怎样可以将它扩增一下？实验室只存了一管，想再扩增点，查了一下说做PCR，但是这种的PCR没有做过，能否指点一二，万分感谢
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9楼2019-03-14 17:43:39
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Esther_Young

铜虫 (小有名气)
有质粒图谱的话 设计引物用农杆菌菌液PCR验证就行了，条带大小一致即可

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10楼2019-03-15 00:36:32
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