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[求助]
蛋白破碎，纯化问题
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1. 200ml大肠杆菌离心弃上清后应该加多少缓冲液重悬破碎 2. 破碎功率多少合适呢，之前都是450w，25-30min，破2秒停1秒。最后液体特别清澈，沉淀特别少，是不是破得太过了？ 3. 测破碎上清酶活很高，但是最近纯化发现酶浓度太低，居然只有0.0几mg/ml，我用AKATA纯化的，进样量1ml，是不是上样太少呢，最后酶活有，但是与粗酶液比差太多。 4. 之前是100ml菌液加10ml缓冲液重悬破碎，一代准备200ml加10ml试试，看看粗酶液浓度高会不会使纯化后浓度也高点 5. 重悬菌体用的Tris-HCL（PH8.0），纯化结合液用的PBS（PH7.4含少量咪唑），两个缓冲液不一致会有影响吗？ 恳请大家帮忙指点一下！非常感谢！ 发自小木虫Android客户端 |
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200ml大概10mlbuffer就够了～纯化后只有零点几的浓度说明你的蛋白根本就没有吧，是不是你的蛋白就不挂柱呢？看一下你的序列，rbs后面是否有6个His～超声的话，我们一般超2s停5s，保证菌体温度不会过高～ 发自小木虫IOS客户端 |
2楼2019-03-05 09:32:54
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4楼2019-03-05 11:46:59
5楼2019-03-05 11:49:07