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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 如何检测蛋白在大肠杆菌中的不表达是因为mRNA的不稳定？
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hongkaichen

金虫 (小有名气)

[交流] 如何检测蛋白在大肠杆菌中的不表达是因为mRNA的不稳定？

RT   如何检测蛋白在大肠杆菌中的不表达是因为mRNA的不稳定？
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1楼 2009-05-09 19:57:52
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hongkaichen

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by rourou6199 at 2009-5-14 17:18:
好像可以加ActD或者Dox抑制转录后，分几个时间段提RNA做Northern看RNA降解没有

ActD或者Dox抑制转录的机制是什么？如果抑制转录后就转录了一部分，mRNA只有一段，用Northern检测不能说明有全长吧？
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11楼2009-05-14 20:47:40
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lifefamily

★
hongkaichen(金币+1,VIP+0):谢谢回答，这是老师的一个作业，跟实验无关. 5-13 12:55
有怎么一说？
不表达的因素多了：
细胞毒性，N端信号肽，稀有密码子，等等。
你换GST或者Trx融合试过了么？
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2楼2009-05-13 10:23:30
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hongkaichen

金虫 (小有名气)
这是老师的一个作业，思考题，跟实验无关，因为mRNA不稳定也可能造成蛋白不表达，所以如果是这种原因，就是让我们用什么方法验证是不是这种原因。开始我觉得可以用观察多聚核糖体现象来验证，但这种方法不能排除菌自身的蛋白表达也能产生这种现象。如果用RT-PCR  P出来了不知道能不能说有mRNA存在，然后排除掉这种原因？
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3楼2009-05-13 13:01:09
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lifefamily

真的，我还第一次听说跟mRNA不稳定有关，孤陋寡闻了……
三、mRNA稳定性与翻译控制
mRNA稳定性主要取决于3’—UTR结构
1．poly(A)尾增加mRNA稳定性，
2．3’-UTR中UA序列导致mRNA不稳定．


高手帮我扫盲一下！？

[ Last edited by lifefamily on 2009-5-13 at 15:09 ]
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4楼2009-05-13 15:06:50
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