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WuYing59

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[交流] 仅用BSA封闭的荧光微球(未加抗体)与二抗的非特异性吸附问题

在利用仅用BSA封闭的荧光微球(未加抗体)进行试验时,发生了非特异性吸附问题。
即在标记过程中,本来应该加入抗体,这里用BSA代替了抗体。

类似于免疫荧光试纸条,在NC膜上C线包被了混合二抗(羊抗鼠/羊抗兔),T线包被了相应抗原。为证明仅用BSA封闭的荧光微球与混合二抗或抗原不发生非特异性吸附,使用仅用BSA封闭的荧光微球进行试验,结果在紫外灯照射下,C线产生荧光,T线不产生荧光。正常情况下不是应该两条线都不显荧光么?出现这种情况可能的原因是什么?

自己猜测:可能是没封闭好,荧光微球与二抗发生了结合?那与T线抗原为何不产生结合呢?

麻烦各位大神指教是哪里出了问题!
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yyy0305

至尊木虫 (著名写手)


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可能是BSA封闭剂没起到封闭的作用,二抗非特异吸附到微球上了,如果二抗的成分复杂为多抗,这个现象是很可能存在的。建议你换个单克隆的抗体,或者更换分子量更小的封闭剂如酪蛋白再试试
2楼2019-02-22 16:35:57
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落雨sjh

铁杆木虫 (职业作家)

沈益锋


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非特异性吸附 肯定会有的,蛋白与蛋白之间也会的
细水长流
3楼2019-03-01 17:51:28
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金芭比bo

新虫 (初入文坛)


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荧光微球是掺杂Eu嘛?

发自小木虫IOS客户端
4楼2021-04-11 18:10:27
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