24小时热门版块排行榜    

查看: 945  |  回复: 12
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

Anson1358

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 谁做过PCR扩增质粒!

各位虫友大家好啊!小弟有个问题请教一下。我最近在用Stratagene的方法做定点突变技术:用一对带有突变位点的引物扩增整个质粒(有7kb),可是每次pcr都P不出任何条带!
    有没有做这方面的兄弟啊!大家交流一下!我的QQ:284526282
回复此楼

» 猜你喜欢

一个人可以不成功,但不可以不成长!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaocy8903

木虫 (知名作家)

7KB完全没有问题,PCR产物可直接转化
4楼2009-05-08 17:03:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

xmchen1015

银虫 (小有名气)

你PCR 的片段太长了,常用的聚合酶能P到5K就不错了。
建议你再设计二条引物,在突变点附近找两个酶切位点,这两条引物跨酶切位点或在酶切位点外,再利用你的突变引物,P出两条片段,这两条片段再P成长的片段,把这个片段用那两个酶切一下,连到同样用这两个酶切的你的质粒上。

[ Last edited by xmchen1015 on 2009-5-8 at 16:12 ]
2楼2009-05-08 16:06:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Anson1358

铁杆木虫 (著名写手)

我用的是pfu 聚合酶!
一个人可以不成功,但不可以不成长!
3楼2009-05-08 16:34:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xmchen1015

银虫 (小有名气)

Pfu 每分钟合成500bp,能合成3K的片段都很难吧?具体情况我也不是很清楚,没有用来P1.5K以上的片段
5楼2009-05-08 19:28:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 调剂310 +3 温柔的晚安 2026-03-25 4/200 2026-03-25 23:16 by peike
[考研] 275求调剂 +3 Micky11223 2026-03-25 5/250 2026-03-25 22:32 by barlinike
[考研] 308求调剂 +5 墨墨漠 2026-03-25 5/250 2026-03-25 22:19 by 544594351
[考研] 材料学硕333求调剂 +4 北道巷 2026-03-24 4/200 2026-03-25 14:16 by mapenggao
[考研] 0854电子信息求调剂 +7 α____ 2026-03-22 9/450 2026-03-25 13:37 by α____
[考研] 359求调剂 +3 王了个楠 2026-03-25 3/150 2026-03-25 12:50 by Dyhoer
[考研] 293求调剂 +7 加一一九 2026-03-24 7/350 2026-03-25 12:02 by userper
[考研] 303求调剂 +6 元夕元 2026-03-20 7/350 2026-03-25 12:00 by edmund7
[考博] 申博26年 +4 八6八68 2026-03-19 4/200 2026-03-24 15:49 by 小Ben呵呵
[考研] 361求调剂 +3 Glack 2026-03-22 3/150 2026-03-23 22:03 by fuyu_
[论文投稿] 急发核心期刊论文 +3 贤达问津 2026-03-23 5/250 2026-03-23 17:13 by 妹子不好惹
[考研] 276求调剂 +3 YNRYG 2026-03-21 4/200 2026-03-23 08:31 by 醉在风里
[考研] 石河子大学(211、双一流)硕博研究生长期招生公告 +3 李子目 2026-03-22 3/150 2026-03-22 21:01 by 怎么释怀
[考研] 求调剂一志愿海大,0703化学学硕304分,有大创项目,四级已过 +6 幸运哩哩 2026-03-22 10/500 2026-03-22 20:10 by edmund7
[考研] 324求调剂 +6 lucky呀呀呀鸭 2026-03-20 6/300 2026-03-22 16:01 by ColorlessPI
[考研] 303求调剂 +5 安忆灵 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:46 by 素颜倾城1988
[考研] 材料学硕301分求调剂 +7 Liyouyumairs 2026-03-21 7/350 2026-03-21 22:31 by peike
[考研] 南京大学化学376求调剂 +3 hisfailed 2026-03-19 6/300 2026-03-20 23:43 by hisfailed
[考研] 一志愿南昌大学,327分,材料与化工085600 +9 Ncdx123456 2026-03-19 9/450 2026-03-20 23:41 by lovewei0727
[考研] 295复试调剂 +8 简木ChuFront 2026-03-19 8/400 2026-03-20 20:44 by zhukairuo
信息提示
请填处理意见