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HL-60细胞转染的相关问题
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| 准备做HL-60的转染试验了，实验室常用的的是lipofectamine 2000,但是听说hepG2的转染效率很低，请问哪种转染方法更适合HL-60?需要改用电转吗？如果用lipofectamine 2000，加入的比例如何?请有经验的朋友告知详细情况，谢谢！ |
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HL-60细胞用lipo2000的转染效率应该是可以的，可以到70%左右，不需要用电转，磷酸钙法也可以有40－50％的 只是在操作上需要注意： 1，细胞铺板时的状态很重要，应该在铺板前尽量消化为单细胞悬液，trypsin＋EDTA充分吹打即可 2，转染前1天铺板，待转染时密度刚好达到80－90％，不能太低，但是也不能长过（细胞成团，堆积）。最好是刚刚长满，此时还在对数生长期 3，加入的质粒要去除内毒素，plasmid:lipo约为1:0.5-1:5。实际上采用说明书的推荐量就很好，1：2.5 4，需要强调，lipo2000对细胞的毒性偏大，在转染后需要及时更换培养液，也正是因为如此我们才更换了DeofectEU 5，用前自己好好看一遍说明书,最好做个预实验 |
2楼2019-02-19 17:11:13
40