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19850311

金虫 (小有名气)

[交流] 求助,谢谢,急啊

1.我用的凝血酶切割GST融合蛋白,切完跑SDS-PAGE电泳总是出现一条淡带,一条浓带,2者差别很大。按理说一条蛋白质被切成2段,浓度是等同的啊,为什么会出现这样的情况,请帮帮忙解释一下!

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-2 at 13:43 ]
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永远不放弃自己
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xlongw1773

金虫 (小有名气)

博士

没切开
123
2楼2009-05-08 14:06:54
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xlongw1773

金虫 (小有名气)

博士

没完全切开。浓的你与MARK 比较,应该是融合蛋白,细的应该是GST或你的目的蛋白。看与MRAK比较来分析。但最大的可能是没切开。
123
3楼2009-05-08 14:09:37
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


19850311(金币+1,VIP+0):切开了 5-8 15:37
PAGE胶染色后表现的是质量而不是浓度……
4楼2009-05-08 14:21:32
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zhyzx

金虫 (小有名气)

没切完全吧应该
5楼2009-05-08 14:22:17
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bbyu007

木虫 (正式写手)


19850311(金币+1,VIP+0):谢谢 5-9 07:49
恩,没有完全切开。
PS:人家没切开,楼上各位也不至于笑成那样啊~~~~
我是笨笨鱼~~~
6楼2009-05-08 14:35:56
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19850311

金虫 (小有名气)

切开了,原先的融合蛋白在电泳处都没有带了。
永远不放弃自己
7楼2009-05-08 15:38:28
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
19850311(金币+2,VIP+0):谢谢哦 5-9 07:49
PAGE胶染色后表现的是质量而不是浓度……

来分析一下这句话还有化学上的一些基本知识~~

标签:蛋白=1:1(mol比,也就是说有一样多的分子数量)
分子量上,标签远远小于蛋白
因此,就算一样多的分子数,到时候染胶染出来,除非是等质量的,否则条带不会是一个粗细。因为染色反映的条带粗细是质量,而不是浓度
摩尔浓度自然是一样的,但质量却不一样
8楼2009-05-08 15:48:00
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19850311

金虫 (小有名气)

GST标签是25KDa,我的目的蛋白是20KDa.
永远不放弃自己
9楼2009-05-08 16:08:59
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wordsworth3180

木虫 (正式写手)


19850311(金币+1,VIP+0):谢谢诶 5-9 07:49
我也遇到了相同的情况
目的蛋白条带很浅 原因大概就是如上战友说的吧
10楼2009-05-08 16:36:44
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