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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助，谢谢，急啊
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19850311

金虫 (小有名气)

[交流] 求助，谢谢，急啊

1.我用的凝血酶切割GST融合蛋白，切完跑SDS-PAGE电泳总是出现一条淡带，一条浓带，2者差别很大。按理说一条蛋白质被切成2段，浓度是等同的啊，为什么会出现这样的情况，请帮帮忙解释一下！

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-2 at 13:43 ]
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永远不放弃自己
1楼 2009-05-08 12:10:31
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xlongw1773

金虫 (小有名气)

博士
没切开
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123
2楼2009-05-08 14:06:54
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xlongw1773

金虫 (小有名气)

博士
没完全切开。浓的你与MARK 比较，应该是融合蛋白，细的应该是GST或你的目的蛋白。看与MRAK比较来分析。但最大的可能是没切开。
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123
3楼2009-05-08 14:09:37
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
19850311(金币+1,VIP+0):切开了 5-8 15:37
PAGE胶染色后表现的是质量而不是浓度……
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4楼2009-05-08 14:21:32
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zhyzx

金虫 (小有名气)
没切完全吧应该
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5楼2009-05-08 14:22:17
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bbyu007

木虫 (正式写手)
★
19850311(金币+1,VIP+0):谢谢 5-9 07:49
恩，没有完全切开。
PS：人家没切开，楼上各位也不至于笑成那样啊~~~~
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我是笨笨鱼~~~
6楼2009-05-08 14:35:56
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19850311

金虫 (小有名气)
切开了，原先的融合蛋白在电泳处都没有带了。
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永远不放弃自己
7楼2009-05-08 15:38:28
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
19850311(金币+2,VIP+0):谢谢哦 5-9 07:49
PAGE胶染色后表现的是质量而不是浓度……

来分析一下这句话还有化学上的一些基本知识~~

标签：蛋白=1：1（mol比，也就是说有一样多的分子数量）
分子量上，标签远远小于蛋白
因此，就算一样多的分子数，到时候染胶染出来，除非是等质量的，否则条带不会是一个粗细。因为染色反映的条带粗细是质量，而不是浓度
摩尔浓度自然是一样的，但质量却不一样
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8楼2009-05-08 15:48:00
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19850311

金虫 (小有名气)
GST标签是25KDa，我的目的蛋白是20KDa.
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永远不放弃自己
9楼2009-05-08 16:08:59
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wordsworth3180

木虫 (正式写手)
★
19850311(金币+1,VIP+0):谢谢诶 5-9 07:49
我也遇到了相同的情况
目的蛋白条带很浅 原因大概就是如上战友说的吧
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10楼2009-05-08 16:36:44
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