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wzgen1983

金虫 (正式写手)

[交流] 怎样确认EDC反应合成抗原成功

我现在用EDC方法合成N-乙酸西地那非-BSA抗原,扫了BSA和产物的紫外全波长和红外,看不出有什么区别,应该是没有合成成功。但是这个方法很经典,怎样都应该是有一点产物的。如果反应不成功,请求各位给点建议和方法。
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ryhq


wzgen1983(金币+1,VIP+0): 5-26 15:40
这么深奥,看来隔行如隔山啊
友情顶贴,希望你早日找到答案!!!
2楼2009-05-07 10:24:36
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yu5445233

木虫 (正式写手)


wzgen1983(金币+1,VIP+0): 5-26 15:41
EDC?!我最近做的一个项目里也有EDC,不过我们那时1,2-二氯乙烷...
帮顶
“恋”是个很强悍的字。它的上半部取自“变态”的“变”,下半部取自“变态”的“态”。
3楼2009-05-07 10:25:20
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leonumn

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★
wzgen1983(金币+1,VIP+0):对我有帮助 5-8 22:25
wzgen1983(金币+1,VIP+0): 5-18 08:35
wzgen1983(金币+2,VIP+0): 5-26 15:42
N-乙酸西地那非是小分子酸

BSA是大分子蛋白, 在碱性条件或等电点PH以上才能游离出氨基

EDC是水溶性缩合剂,
因此, 只要反应PH值合适, 时间较长, 形成N-乙酸西地那非-BSA抗原是合理可行的(经典方法嘛),

用物理或化学方法直接检测N-乙酸西地那非是否连到BSA上很难, 除非小分子有特殊集团,特征吸收或特殊标记.
如果有N-乙酸西地那非抗体, 用ELISA简单测定复合物能否结合抗体就可以了

如果没有抗体, 就只能做免疫实验, 看看能否产生抗体了(听天由命, 但希望还是大大的,确只要每步操作都规范化了)

祝好运气!!!
4楼2009-05-07 10:36:22
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郭继波

荣誉版主 (文学泰斗)

神龍教梦家园的小百姓-波波

优秀版主优秀版主

N-乙酸西地那非是小分子酸

BSA是大分子蛋白, 在碱性条件或等电点PH以上才能游离出氨基

EDC是水溶性缩合剂,
因此, 只要反应PH值合适, 时间较长, 形成N-乙酸西地那非-BSA抗原是合理可行的(经典方法嘛),

用物理或化学方法直接检测N-乙酸西地那非是否连到BSA上很难, 除非小分子有特殊集团,特征吸收或特殊标记.
如果有N-乙酸西地那非抗体, 用ELISA简单测定复合物能否结合抗体就可以了

如果没有抗体, 就只能做免疫实验, 看看能否产生抗体了(听天由命, 但希望还是大大的,确只要每步操作都规范化了)
菩提本无树,明镜亦非台。
5楼2009-05-07 13:45:23
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wzgen1983

金虫 (正式写手)

我是扫紫外全波长,溶剂是甲醇,但是N-乙酸西地那非在一个很大的范围内都有吸收,而且吸收值蛮大的。按理说,连上去之后,产物中不仅有BSA的吸收峰,而且还有N-乙酸西地那非的吸收峰。但是我扫产物得到的紫外全波长图谱得到的图和BSA扫的很像,因此不能确定是否连上了。
       有人建议我用DCC的方法,还有人说N-乙酸西地那非在一个很大的范围内都有吸收可能是我的溶剂有问题。但是我扫全波长时有空白的呀。
      再问一下,是不是扫全波长对溶剂有要求。
6楼2009-05-08 22:30:45
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wzgen1983

金虫 (正式写手)

怎么没人参加讨论了,请各位高手多指点指点。
7楼2009-05-10 17:58:08
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wzgen1983

金虫 (正式写手)

请大家帮帮忙,多讨论。我以前没怎么注意pH。但是BSA的等电点是4.8.但是我的pH都在7以上,不知为什么就合不上去呢?我看国外文献都是在9.4以上。我试试吧,如果成功了,跟大家分享一下。
8楼2009-05-10 20:05:48
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