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目标蛋白不能表达，求助！ 已有3人参与
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帖子发在另一个版没人回答，不能在此发一模一样的内容，只好贴网址了 http://muchong.com/t-13164895-1 请大家帮忙看看，非常感谢！ |
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【答案】应助回帖
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-04-10 20:56:30
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-04-10 20:56:30
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表达的什么？可溶性蛋白还是膜蛋白还是别的什么产物？基因来源是什么，表达宿主是什么？ 发自小木虫IOS客户端 |
5楼2019-04-10 13:22:09
【答案】应助回帖
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不表达是很正常的。通常一次会做好多不同的克隆，运气好会得到一个比较理想的。 你可以换质粒：pET28a, 28b, 32a, 60, etc. 同一个质粒也可以试不同的酶切位点。 还不行就截短基因。或者多连一个标签蛋白：His，SUMO等，这样有一个好处，你可以western blot验证是否表达。 再不行就真核表达吧。 按理说，既然自然界中有这个蛋白，就一定有办法表达出来，你要做的就是找到一个合适的条件。 密码子是肯定要优化的。 表达条件可以先不管，我习惯是OD0.6， 20℃过夜诱导，0.4 mM IPTG。 表达条件一般只决定表达量的高低，不决定是否表达。 |
6楼2019-04-11 16:55:23