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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 表达的可溶性蛋白如何测定其活性
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xiong213

[交流] 表达的可溶性蛋白如何测定其活性

小弟最近在做原核表达，在15摄氏度诱导下表达的蛋白经过超声波破碎后电泳可以看到部分可溶性蛋白，现在想对其进行蛋白活性检测，不知道大家做过没有，给指点一下吧。急急急！谢谢各位兄弟姐妹了！
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1楼 2009-05-06 23:18:36
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shenqicc

金虫 (小有名气)
原核表达在有的情况下，可溶性蛋白还是比较多的，这得看你用的载体是否有定位于周质或胞外的信号肽，将你表达的目的产物分泌于目的区域，这得视不同情况而定了，我们实验室目前也在做这方面课题，还牵涉到原核菌的分泌工程，而你用的是15℃培养，这种温度下菌表达的包涵体应该不多，你看看用测定蛋白活性的缓冲性破碎菌体后测定活性试试~~
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7楼2009-05-07 08:38:07
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hihoney

铁杆木虫 (职业作家)
都不知道表达的蛋白是什么性质，表达何用？
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2楼2009-05-07 08:23:02
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shenqicc

金虫 (小有名气)
怎么会要破碎才有可溶性蛋白？发酵液中有可溶性蛋白吗？你这种情况有可能是周质里面的，你将周质释放出来可测定蛋白活性，或者用破碎的方法，用低强度破细胞，而后测破碎上清的酶活！
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3楼2009-05-07 08:26:55
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xiong213

我这个是原核表达，原核表达的可溶性蛋白一般量比较少，大部分都是以包涵体的形式存在，现在想用破碎后的上清去测蛋白活性。
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4楼2009-05-07 08:31:54
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