应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 表达的可溶性蛋白如何测定其活性
101/1返回列表
查看: 710  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

xiong213

[交流] 表达的可溶性蛋白如何测定其活性

小弟最近在做原核表达，在15摄氏度诱导下表达的蛋白经过超声波破碎后电泳可以看到部分可溶性蛋白，现在想对其进行蛋白活性检测，不知道大家做过没有，给指点一下吧。急急急！谢谢各位兄弟姐妹了！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-05-06 23:18:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hihoney

铁杆木虫 (职业作家)
都不知道表达的蛋白是什么性质，表达何用？
赞一下 回复此楼
2楼2009-05-07 08:23:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shenqicc

金虫 (小有名气)
怎么会要破碎才有可溶性蛋白？发酵液中有可溶性蛋白吗？你这种情况有可能是周质里面的，你将周质释放出来可测定蛋白活性，或者用破碎的方法，用低强度破细胞，而后测破碎上清的酶活！
赞一下 回复此楼
Publish OR Perish!
3楼2009-05-07 08:26:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiong213

我这个是原核表达，原核表达的可溶性蛋白一般量比较少，大部分都是以包涵体的形式存在，现在想用破碎后的上清去测蛋白活性。
赞一下 回复此楼
4楼2009-05-07 08:31:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lifefamily

包涵体的话你换GST融合或者Trx融合表达咯
赞一下 回复此楼
5楼2009-05-07 08:35:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lifefamily

要测蛋白活性，我想到的只有通过酶和底物的特异性反应来测。
你那蛋白是一种酶么？
赞一下 回复此楼
6楼2009-05-07 08:36:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shenqicc

金虫 (小有名气)
原核表达在有的情况下，可溶性蛋白还是比较多的，这得看你用的载体是否有定位于周质或胞外的信号肽，将你表达的目的产物分泌于目的区域，这得视不同情况而定了，我们实验室目前也在做这方面课题，还牵涉到原核菌的分泌工程，而你用的是15℃培养，这种温度下菌表达的包涵体应该不多，你看看用测定蛋白活性的缓冲性破碎菌体后测定活性试试~~
赞一下 回复此楼
Publish OR Perish!
7楼2009-05-07 08:38:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

evarain

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by hihoney at 2009-5-7 08:23:
都不知道表达的蛋白是什么性质，表达何用？

严重同意～如果是一个酶的话，只能去查文献，找方法了，试试看酶学手册上有没有你想要的？
赞一下 回复此楼
8楼2009-05-07 09:17:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

GinTonic

金虫 (小有名气)
个人觉得楼主问的问题不是很清楚啊
原核表达后要首先要低温纯化获得融合蛋白，在根据标签大小，考虑是否需要切掉，不切掉的话可以直接用试剂盒测酶活的 我们这边的思路就是这样的哈
赞一下 回复此楼
9楼2009-05-07 13:47:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiong213

测定蛋白活性的缓冲液破碎菌体后测定活性试试，不知道朋友的破碎缓冲液配方是？我是初学者所以有很多问题都不会，让兄弟姐妹们笑话了，谢谢你们提的建议，我的那个蛋白是PGIP基因在大肠杆菌的表达产物，现在我有PG酶，但是不知道怎么操作了，再说表达的产物不知道还用不用浓缩，我该怎么做呢？谢谢朋友们的热心帮助！有自己做过的或者听说过别人做过的，给个建议吧，谢谢！
赞一下 回复此楼
10楼2009-05-08 16:50:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xiong213 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料与化工 322求调剂 +6 然11 2026-03-19 6/300 2026-03-25 18:37 by haxia
[考研] 招08考数学 +8 laoshidan 2026-03-20 17/850 2026-03-25 17:52 by 一个红太阳
[考研] 293求调剂 +7 加一一九 2026-03-24 7/350 2026-03-25 12:02 by userper
[考研] 085600材料与化工调剂 +9 A-哆啦Z梦 2026-03-23 15/750 2026-03-25 11:18 by Ainin_
[考研] 考研化学308分求调剂 +10 你好明天你好 2026-03-23 11/550 2026-03-25 10:23 by userper
[考研] 286求调剂 +11 Faune 2026-03-21 11/550 2026-03-25 10:11 by 雾散后相遇lc
[考研] 318求调剂 +3 plum李子 2026-03-23 3/150 2026-03-25 09:42 by 雾散后相遇lc
[考研] 求调剂，一志愿:南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕，总分289分 +6 @taotao 2026-03-19 6/300 2026-03-25 08:37 by 木托莫露露
[考研] 340求调剂 +5 话梅糖111 2026-03-24 5/250 2026-03-25 06:53 by ilovexiaobin
[考研] 321求调剂 +4 Ymlll 2026-03-24 4/200 2026-03-24 14:44 by sprinining
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境，总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-23 8/400 2026-03-23 20:36 by Creta
[考研] 070300，一志愿北航320求调剂 +3 Jerry0216 2026-03-22 5/250 2026-03-23 09:16 by 。。堂堂
[考研] 323求调剂 +6 洼小桶 2026-03-18 6/300 2026-03-23 00:29 by king123！
[考研] 求调剂院校信息 +6 CX 330 2026-03-21 6/300 2026-03-22 15:25 by 无懈可击111
[基金申请] 山东省面上项目限额评审 +4 石瑞0426 2026-03-19 4/200 2026-03-22 08:50 by Wei_ren
[考研] 一志愿华中科技大学071000，求调剂 +4 沿岸有贝壳6 2026-03-21 4/200 2026-03-22 07:21 by ilovexiaobin
[考研] 336求调剂 +5 rmc8866 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:24 by 学员8dgXkO
[基金申请] 学校已经提交到NSFC，还能修改吗？ 40+4 babangida 2026-03-19 9/450 2026-03-21 16:12 by babangida
[考研] 一志愿 西北大学 ，070300化学学硕，总分287，双非一本，求调剂。 +4 晨昏线与星海 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:15 by JourneyLucky
[考研] 求调剂一志愿南京航空航天大学289分 +3 @taotao 2026-03-19 3/150 2026-03-20 21:34 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭