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细胞转染实验中为什么不能加血清？
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传统的转染试剂有一定的细胞毒性，在转染过程由于提高细胞的通透性因而不能在培养基中添加抗生素。如，阳离子脂质体。带正电的脂质体与核酸带负电的磷酸基团形成复合物被细胞内吞。血清中含有大量的蛋白质，在转染过程中，带负电的蛋白质可能干扰阳离子脂质体对核酸的吸附，影响转染效率。另外，使用脂质体等转染试剂时，由于含血清转染会将血清中的蛋白带入细胞，引发细胞毒性，导致转染效率降低，故不能有血清转染。这些转染试剂要求在转染前换无血清培养基，转染后4-6h在更换成有血清培养基，这其实是为了减轻转染造成的细胞毒性。 不同的细胞及转染试剂要求转染的条件是不同的。最好是在第一次实验前做一个预实验，比如：HeLa，293，CHO，COS7， MCF－7，HepG2等细胞，是否加血清，对不同的细胞是有不同的影响的，有些细胞是可以有血清的，有些加血清就会受影响。所以，普通的转染试剂一定要进行预实验，和条件优化。 转染后在6小时左右最好换液且换为有血清的培养基，其一因为普通转染试剂对细胞的毒性作用大，其二可降低因血清的缺乏引起的细胞的死亡。转染时不加血清是防止血清的干扰作用，转染后可适时加入。加入过早会引起未转染细胞的优势生长，过晚会引起较多细胞死亡。可实时观察1/5细胞变圆的时候加入血清。 现在市面上也有一些改进了的转染试剂，可以在转染时含有血清，如Entranster试剂，只浓缩包裹核酸不会将血清带入细胞。Entranster采用有血清转染，不用在有血清和无血清之间更换，增加工作量，同时有血清转染不仅不造成细胞毒性，而且由于血清的存在，有利于细胞的状态维护，提高转染效率。 由于Entranster的内毒素和细胞毒性都非常之低，加上转染复合物能够高效的在完全培养基中形成，因而整个转染过程可以在含血清而且是含有抗生素的培养基中操作，无需更换培养基，这极大的方便转染操作！适用于包括干细胞，神经细胞，原代细胞和其他方法难转染细胞的转染在内的多种真核细胞。 细胞毒性的大小往往意味着对细胞生理活动影响的大小。这会对相关研究数据产生严重的干扰，甚至影响研究的结论。因此，选择一种高效方便的转染试剂是细胞转染成功的关键。 |
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