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脂质体转染JURKAT细胞后，用G418筛选
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| 我正在用脂质体2000做JURKAT细胞株转染,用G418筛选后存货或的细胞很少,同时这些细胞也不分裂增殖了，感觉也快死了.我准备重新再做一次，这次打算先用PHA先把细胞株激活,再转染,这样能提高转染效率吗? |
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| 那样做不能提高转染效率,并且会使转染后筛选更麻烦,激活后再转染脂质体的毒性会更明显。转染失败的原因a:转染时间过长,脂质体的后续毒性很大,b:加G418过早;c:G418梯度设置不好;d:未转进去。我们实验室用24孔板做，每孔2ulRFECT，设置siRNA终浓度10nM,30nM,50nM,100nM四个梯度，每个梯度做2个复孔，建议在转染时一定要注意脂质体的毒性,随时观察细胞状态,一旦细胞状态变化要及时终止转染,但转染效率与转染时间有一定的关系,太短的转染时间会导致转不进去而转染失败,如果你的细胞比较耐受,你可以在严密监视细胞的情况下尽量延长转染时间。最好能设一个脂质体的梯度,找到最佳脂质体用量；延迟G418的加入时间,每一个G418浓度间隔时间延长 |
2楼2019-01-31 17:14:43