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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » GAL4 DBD序列咨询
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小寒十三

金虫 (正式写手)

[求助] GAL4 DBD序列咨询 已有2人参与

药物化学专业，生物小白一只，最近要做药化的细胞活性测试，但细胞买不到，需要构建质粒然后瞬时转染进细胞里面，所以打算请公司构建质粒，一个是表达质粒，一个是报告质粒。

文献上关于构建报告质粒的描述是由 Invitrogen 公司合成约 130 个核苷酸 GAL4RE 片段的两条互补单链，此GAL4RE 片段含有 5 个拷贝 GAL4 的 DNA 结合序列(CGG  AGTACTGTCC  T)以及 Kpn  I 和 Smal  I 双酶切位点。

公司问我GAL4RE的序列是什么。

有人告诉RE应该是response element ,指的是DBD区域

在一篇文献上看到酿酒酵母GAL4蛋白由881个氨基酸残基构成，主要包含DNA结合域与DNA激活域两部分(Laughon et al.1984；Oshima Yasuji 1982)。DNA结合域位于蛋白N端的1～65肽段。那是不是说要先查到gal4的全序列，在找到前65个序列就可以？这种DBD序列是固定的还是会因为载体质粒的不同而稍微不同？因为，前面一篇说的约130个核苷酸，后一篇说的是65个氨基酸，碱基序列好像不一样多。

还有这段话“此GAL4RE 片段含有 5 个拷贝 GAL4 的 DNA 结合序列(CGG  AGTACTGTCC  T)”中的碱基序列是指什么？意思是只要这几个序列特定，其他的碱基可以随意添加？

有哪位可以帮忙解答，万分感激
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1楼 2019-01-23 09:55:22
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ULYSSEESWB

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小寒十三(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-01-24 12:48:21
小寒十三: 金币+5, ★有帮助 2019-01-24 17:23:34
lz还是先搜索 哺乳动物细胞单杂交，核受体调节剂筛选的学位论文看看吧...
response element 序列要选SCI上的
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2楼2019-01-23 13:27:34
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开水中游泳

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
小寒十三: 金币+5, ★有帮助 2019-01-31 20:58:20
楼主是否考虑，不要构建细胞株呢，用其他方法去检测，因为细胞株构建太麻烦了，目前进行化合物筛选的技术和手段有很多种，有基于细胞开发的方法，也有直接酶学方法，还有生物物理的方法等等。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2019-01-29 15:52:29
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