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小寒十三金虫 (正式写手)
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[求助]
GAL4 DBD序列咨询 已有2人参与
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药物化学专业，生物小白一只，最近要做药化的细胞活性测试，但细胞买不到，需要构建质粒然后瞬时转染进细胞里面，所以打算请公司构建质粒，一个是表达质粒，一个是报告质粒。 文献上关于构建报告质粒的描述是由 Invitrogen 公司合成约 130 个核苷酸 GAL4RE 片段的两条互补单链，此GAL4RE 片段含有 5 个拷贝 GAL4 的 DNA 结合序列(CGG AGTACTGTCC T)以及 Kpn I 和 Smal I 双酶切位点。 公司问我GAL4RE的序列是什么。 有人告诉RE应该是response element ,指的是DBD区域 在一篇文献上看到酿酒酵母GAL4蛋白由881个氨基酸残基构成，主要包含DNA结合域与DNA激活域两部分(Laughon et al.1984；Oshima Yasuji 1982)。DNA结合域位于蛋白N端的1～65肽段。那是不是说要先查到gal4的全序列，在找到前65个序列就可以？这种DBD序列是固定的还是会因为载体质粒的不同而稍微不同？因为，前面一篇说的约130个核苷酸，后一篇说的是65个氨基酸，碱基序列好像不一样多。 还有这段话“此GAL4RE 片段含有 5 个拷贝 GAL4 的 DNA 结合序列(CGG AGTACTGTCC T)”中的碱基序列是指什么？意思是只要这几个序列特定，其他的碱基可以随意添加？ 有哪位可以帮忙解答，万分感激 |
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