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鲲407

新虫 (初入文坛)

[求助] 做western出现了一个问题,想请各位老师们帮忙分析一下,期待回复,感谢! 已有1人参与

本人刚开始做western,想请教一下大家,我曝的 actin,转膜的时候电流400ma,转了70min,然后发现marker不只转到膜上了,也转到滤纸上了,而且三层滤纸都转上了,然后我去曝光的时候发现膜上什么也没有,我就怀疑是不是我转膜的时候过转了,蛋白都转滤纸上了,所以才没曝出来。

可是别的实验室也有400ma转70min的,也能做出来,也没出现过marker转到滤纸上的情况,所以想请教楼主这是什么原因,有的老师说转膜的时候就算时间长了也不会过转的,蛋白质会和膜结合在一起,所以还想问一下转膜时到底会不会出现过转的情况。感谢!

@gyesang 发自小木虫Android客户端
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鲲407

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by chaosyw at 2019-01-20 10:12:20
楼上正解,应该是转过了,推荐一篇wb操作方面的综述供参考吧:
https://www.labome.com/method/Western-Blot-Protocol-Troubleshootings-and-Survey-Results-on-Instruments-and-Reagents.html

感谢!

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5楼2019-01-20 11:08:52
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药大C斌

新虫 (正式写手)

不同的转膜液配方,转膜时间不一样,最好自己摸索一下条件。

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2楼2019-01-19 10:25:48
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chaosyw

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
楼上正解,应该是转过了,推荐一篇wb操作方面的综述供参考吧:
https://www.labome.com/method/We ... s-and-Reagents.html
3楼2019-01-20 10:12:20
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鲲407

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 药大C斌 at 2019-01-19 10:25:48
不同的转膜液配方,转膜时间不一样,最好自己摸索一下条件。

好的,谢谢!

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4楼2019-01-20 11:08:25
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