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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 做western出现了一个问题，想请各位老师们帮忙分析一下，期待回复，感谢！
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鲲407

新虫 (初入文坛)

[求助] 做western出现了一个问题，想请各位老师们帮忙分析一下，期待回复，感谢！ 已有1人参与

本人刚开始做western，想请教一下大家，我曝的 actin，转膜的时候电流400ma，转了70min，然后发现marker不只转到膜上了，也转到滤纸上了，而且三层滤纸都转上了，然后我去曝光的时候发现膜上什么也没有，我就怀疑是不是我转膜的时候过转了，蛋白都转滤纸上了，所以才没曝出来。

可是别的实验室也有400ma转70min的，也能做出来，也没出现过marker转到滤纸上的情况，所以想请教楼主这是什么原因，有的老师说转膜的时候就算时间长了也不会过转的，蛋白质会和膜结合在一起，所以还想问一下转膜时到底会不会出现过转的情况。感谢！

@gyesang 发自小木虫Android客户端
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1楼 2019-01-19 09:36:58
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药大C斌

新虫 (正式写手)
不同的转膜液配方，转膜时间不一样，最好自己摸索一下条件。

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2楼2019-01-19 10:25:48
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chaosyw

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼上正解，应该是转过了，推荐一篇wb操作方面的综述供参考吧：
https://www.labome.com/method/We ... s-and-Reagents.html
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3楼2019-01-20 10:12:20
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鲲407

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 药大C斌 at 2019-01-19 10:25:48
不同的转膜液配方，转膜时间不一样，最好自己摸索一下条件。

好的，谢谢！

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4楼2019-01-20 11:08:25
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鲲407

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by chaosyw at 2019-01-20 10:12:20
楼上正解，应该是转过了，推荐一篇wb操作方面的综述供参考吧：
https://www.labome.com/method/Western-Blot-Protocol-Troubleshootings-and-Survey-Results-on-Instruments-and-Reagents.html

感谢！

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5楼2019-01-20 11:08:52
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