应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » pcr跑不出目的条带
81/1返回列表
查看: 2080  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

请教各位

新虫 (小有名气)

[求助] pcr跑不出目的条带 已有4人参与

之前梯度的时候跑出来了想要的条带，这几天在同样的温度下怎么都跑不出来，只有二聚体，请各位给看一下什么情况，体系是buffer2.5 dntp2.0 mg1.5 cdna1 f1 r1 extaq0.2 ddh2o补齐至25   pcr体系是94三分钟 94三十秒 ？？？三十秒 72一分半 35个循环 72七分钟 四度保存 重新设计的全长引物，之前二聚体都少，现在能看到二聚体，之前也看到过很多条带，现在条带跑不出来了，只能出来二聚体

@biostar2009 发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2019-01-06 13:20:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主
模板有问题？

发自小木虫Android客户端
回复此楼
2楼2019-01-07 00:49:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

请教各位

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 渊博震天 at 2019-01-07 00:49:19
模板有问题？

模板有问题不会有引物二聚体吧

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2019-01-07 08:21:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Cherishqj

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-01-12 09:51:44
引物二聚体是引物互补配对形成的吧，这不能说明模板没问题呢
赞一下 回复此楼
4楼2019-01-11 11:44:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

annwt

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

重新设计的全长引物--------那以前的梯度白做了
赞一下 回复此楼
5楼2019-01-26 08:59:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoyuan612

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

扩增有二聚体有可能是扩增条件有问题，看下模板的具体浓度，如果浓度低，就加大模板量，如果浓度过高，需要进行稀释，另外退火温度有没有摸过，如果跑出来很多条带，那么有可能是退火温度低了，另外还可以考虑换个酶试试
赞一下 回复此楼
6楼2019-02-18 11:05:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cloveseven

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

1 新换的引物问题
2 这次PCR和上几次的模板是否一致
从这两个方面分析一下，ex-taq酶还是较好能PCR出来的
赞一下 回复此楼
7楼2019-03-21 17:02:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

正清哲和

至尊木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★ ★
渊博震天: 金币+5, 鼓励回帖交流 2019-04-10 08:27:20
一般来说跑梯度用mix跑的，模板用菌液、质粒、基因组DNA都可以，浓度要求不高，但确定温度后就用Extaq、pfu，尤其是pfu对模板的浓度要求很高，浓度高于20ng/ul就扩不出来了。不知你是不是遇到这种情况

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
对他人，可以善待、珍重，但无需寄以厚望，依旧充满感激 ，做好自己！
8楼2019-04-09 22:41:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 请教各位 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 复试调剂 +5 呼呼？~+123456 2026-03-08 6/300 2026-03-09 21:32 by 呼呼？~+123456
[考研] 材料学学硕308分/本科东北大学/一志愿西北工业大学/ 5+3 苏尧幺幺 2026-03-03 9/450 2026-03-09 14:43 by ruiyingmiao
[考研] 070300化学求调剂 +5 扑风铃的猫 2026-03-08 10/500 2026-03-09 13:58 by macy2011
[基金申请] 第二个面上项目的获批几率如何？ +3 wawm9296 2026-03-04 5/250 2026-03-09 13:00 by xujie4132
[考研] 0856求调剂 +3 squirtle11 2026-03-07 3/150 2026-03-09 09:54 by @飒飒飒飒
[考研] 085701环境工程专硕求调剂 +5 幼稚园大班打手 2026-03-08 5/250 2026-03-09 07:07 by houyaoxu
[考研] 286求调剂 +12 Faune 2026-03-06 14/700 2026-03-08 14:54 by hmn_wj
[考研] 085701环境工程专业，初试305，均过国家A区线 +7 卡卡来了@ 2026-03-07 8/400 2026-03-08 06:40 by 刘兵
[考研] 070300化学求调剂292分 +3 打烊eee 2026-03-07 3/150 2026-03-07 20:04 by houyaoxu
[考博] 2026年博士名额捡漏 +4 科研ya 2026-03-04 7/350 2026-03-06 16:05 by 科研ya
[考研] 化学专业调剂 +5 好好好1233 2026-03-04 6/300 2026-03-06 15:38 by @飒飒飒飒
[考研] 268求调剂 +4 刘合华 2026-03-05 4/200 2026-03-06 11:18 by lature00
[考研] 0856材料与化工求调剂！ +5 化工考生111 2026-03-04 11/550 2026-03-06 01:20 by 化工考生111
[考研] 求调剂，学校研究所都可以，材料与化工267分 +6 wmx1 2026-03-05 6/300 2026-03-05 20:01 by houyaoxu
[考研] 一志愿武理085601专硕347分求调剂 +4 啊欧欧欧 2026-03-04 5/250 2026-03-05 19:27 by Leding1356
[考研] 一志愿西交化工专硕288专业课93求调剂 +6 好运好运接接 2026-03-04 6/300 2026-03-05 09:36 by houyaoxu
[考研] 376求调剂 +3 王浩然sam 2026-03-04 3/150 2026-03-05 07:48 by bxbo
[考研] 264求调剂 +8 26调剂 2026-03-03 8/400 2026-03-04 20:50 by 一切OK
[考研] 295求调剂 +6 等春来， 2026-03-04 6/300 2026-03-04 16:11 by zhukairuo
[考研] 292求调剂 +3 sgbl 2026-03-03 3/150 2026-03-03 17:30 by barlinike
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭