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请教各位

新虫 (小有名气)

[求助] pcr跑不出目的条带已有4人参与

之前梯度的时候跑出来了想要的条带,这几天在同样的温度下怎么都跑不出来,只有二聚体,请各位给看一下什么情况,体系是buffer2.5 dntp2.0 mg1.5 cdna1 f1 r1 extaq0.2 ddh2o补齐至25   pcr体系是94三分钟 94三十秒 ???三十秒 72一分半 35个循环 72七分钟 四度保存 重新设计的全长引物,之前二聚体都少,现在能看到二聚体,之前也看到过很多条带,现在条带跑不出来了,只能出来二聚体

@biostar2009 发自小木虫Android客户端
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xiaoyuan612

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

扩增有二聚体有可能是扩增条件有问题,看下模板的具体浓度,如果浓度低,就加大模板量,如果浓度过高,需要进行稀释,另外退火温度有没有摸过,如果跑出来很多条带,那么有可能是退火温度低了,另外还可以考虑换个酶试试
6楼2019-02-18 11:05:24
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