24小时热门版块排行榜    

查看: 651  |  回复: 7
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

灵果Y

[交流] 关于PCR体系的问题

看到论坛上说按正常PCR配好体系后吸1微升菌液做模版
程序96℃5分钟——[95℃30秒-xx30 秒-72℃XX】——72℃10分钟-16℃
30个循环。
我看了一些PCR体系貌似也是差不多这样子的,温度或者时间也只是微调,区别不大,我想知道这选择这个体系的原因?还有打xx的地方的选择是靠什么因素决定的。第一个xx是退火温度的意思吗?请各位大虾帮我解答一下这个问题,虽然看上去有些低级。本人是新手。
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

呃?引物自己设计的才对退火温度才比较好摸吧……
当初设计的时候软件就给了
5楼2009-05-03 22:07:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

一开始96度是在煮菌使得DNA暴露出来
94~96度都ok~
第一个xx是退火温度,根据引物来决定
第二个xx延伸时间根据片段长短和酶的扩增能力决定
一般的Taq酶是1kb/min
2楼2009-05-03 21:50:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

灵果Y

哦,原来是这样。but引物有的是自己设计的,怎么知道退火温度呢,还是要通过做几个重复实验来选择的?
3楼2009-05-03 21:59:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elvias

铁杆木虫 (正式写手)

引物设计软件可以告诉你退火温度,另一方面也可以自己简便计算一下
Tm=4*(A+T)+2*(C+G),前提是你的引物不是特别长的那种,一般退火温度在计算出的Tm值的正负5度之内。如果你是在不放心,可以做一个pcr梯度,来确定最适温度
4楼2009-05-03 22:03:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 总分293求调剂 +4 加一一九 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:34 by barlinike
[考研] 生物技术与工程 +3 1294608413 2026-03-25 4/200 2026-03-25 18:02 by 1294608413
[考研] 284求调剂 +15 Zhao anqi 2026-03-22 15/750 2026-03-25 12:51 by wht0531
[考研] 293求调剂 +7 加一一九 2026-03-24 7/350 2026-03-25 12:02 by userper
[考研] 287求调剂 +10 晨昏线与星海 2026-03-19 11/550 2026-03-25 10:35 by userper
[考研] 318求调剂 +3 plum李子 2026-03-23 3/150 2026-03-25 09:42 by 雾散后相遇lc
[考研] 0854 考研调剂 招生了!AI 方向 +5 pk3725069 2026-03-19 17/850 2026-03-24 17:30 by zhouxuan..
[考研] 材料考研调剂生 +3 黄粱一梦千年 2026-03-24 3/150 2026-03-24 17:00 by barlinike
[考研] 300求调剂,材料科学英一数二 +5 leaflight 2026-03-24 5/250 2026-03-24 16:25 by laoshidan
[材料工程] 一志愿C9材料与化工专业总分300求调剂 +4 曼111 2026-03-24 5/250 2026-03-24 15:44 by 星空星月
[考研] 276求调剂。有半年电池和半年高分子实习经历 +9 材料学257求调剂 2026-03-23 10/500 2026-03-24 07:36 by wangy0907
[考研] 一志愿国科过程所081700,274求调剂 +3 三水研0水立方 2026-03-23 3/150 2026-03-23 23:11 by MajorWen
[考研] 284求调剂 +3 yanzhixue111 2026-03-23 6/300 2026-03-23 22:58 by pswait
[考研] 327求调剂 +5 prayer13 2026-03-23 5/250 2026-03-23 22:11 by 星空星月
[考研] 285求调剂 +6 ytter 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:09 by 星空星月
[基金申请] 学校已经提交到NSFC,还能修改吗? 40+4 babangida 2026-03-19 9/450 2026-03-21 16:12 by babangida
[考研] 22 350 本科985求调剂,求老登收留 +3 李轶男003 2026-03-20 3/150 2026-03-21 13:28 by 搏击518
[考研] 330求调剂0854 +3 assdll 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:01 by 搏击518
[考研] 0856调剂,是学校就去 +8 sllhht 2026-03-19 9/450 2026-03-20 14:25 by 无懈可击111
[考研] 材料考研调剂 +3 xwt。 2026-03-19 3/150 2026-03-19 11:22 by w沐阳w
信息提示
请填处理意见