24小时热门版块排行榜    

查看: 719  |  回复: 7
当前主题已经存档。

灵果Y

[交流] 关于PCR体系的问题

看到论坛上说按正常PCR配好体系后吸1微升菌液做模版
程序96℃5分钟——[95℃30秒-xx30 秒-72℃XX】——72℃10分钟-16℃
30个循环。
我看了一些PCR体系貌似也是差不多这样子的,温度或者时间也只是微调,区别不大,我想知道这选择这个体系的原因?还有打xx的地方的选择是靠什么因素决定的。第一个xx是退火温度的意思吗?请各位大虾帮我解答一下这个问题,虽然看上去有些低级。本人是新手。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

一开始96度是在煮菌使得DNA暴露出来
94~96度都ok~
第一个xx是退火温度,根据引物来决定
第二个xx延伸时间根据片段长短和酶的扩增能力决定
一般的Taq酶是1kb/min
2楼2009-05-03 21:50:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

灵果Y

哦,原来是这样。but引物有的是自己设计的,怎么知道退火温度呢,还是要通过做几个重复实验来选择的?
3楼2009-05-03 21:59:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elvias

铁杆木虫 (正式写手)

引物设计软件可以告诉你退火温度,另一方面也可以自己简便计算一下
Tm=4*(A+T)+2*(C+G),前提是你的引物不是特别长的那种,一般退火温度在计算出的Tm值的正负5度之内。如果你是在不放心,可以做一个pcr梯度,来确定最适温度
4楼2009-05-03 22:03:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

呃?引物自己设计的才对退火温度才比较好摸吧……
当初设计的时候软件就给了
5楼2009-05-03 22:07:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

灵果Y

嗯,得去学学那个设计软件。大多数用的是primer 5.0吧,我只知道这个
6楼2009-05-03 22:08:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elvias

铁杆木虫 (正式写手)

primer 5.0就足够了,软件使用贵精不贵多
7楼2009-05-03 22:10:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

灵果Y

晓得了,谢谢
8楼2009-05-05 00:08:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 灵果Y 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 6GojgJvkDudM 2026-08-16 4/200 2026-08-17 11:46 by 4GBAYCdVQoK3
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +7 zju2000 2026-08-16 7/350 2026-08-17 11:31 by Iktsuarpok9
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +10 Ldrop2023 2026-08-13 10/500 2026-08-17 09:59 by 小豌豆_发芽
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 6GojgJvkDudM 2026-08-16 3/150 2026-08-17 09:49 by xLVPIRuSvCUe
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +32 医学老男孩 2026-08-13 74/3700 2026-08-16 21:05 by 医学老男孩
[论文投稿] 岩土工程学报什么时候才能终审完呐 25+3 yeager111 2026-08-10 4/200 2026-08-16 20:42 by tfang
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 6/300 2026-08-16 20:07 by 奶牛小黑
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +6 wangze12014 2026-08-14 7/350 2026-08-15 20:12 by gltch
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
信息提示
请填处理意见