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Cherishqj

铜虫 (小有名气)

[求助] 紫外吸收法测酶活

本人纯化了一个重组酶,想测试是否有活性,按文献中的方法测定235nm处的紫外吸收,但是我在用对照组标零的时候吸光值一直在变,范围还挺大的,之前用这台分光光度计做蛋白浓度的标曲是没有问题的(当时用的595nm波长),我的对照组是将酶煮沸5min灭活,再加底物,师姐说可能蛋白变性了导致溶液不稳定,我又把对照改成了只有底物,吸光度仍然无法标零,但是当我把波长改为400nm,600nm的时候,标零是没有问题的,这到底是为什么啊???为什么在可见光范围内就是稳定的呢?实验室两台分光光度计我都试了,分光光度计是新世纪T9紫外可见分光光度计,希望能给点建议,谢谢大家
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Cherishqj

铜虫 (小有名气)

试了一下,好像只在紫外区跳动,可见区是稳定的,我用的微量石英比色皿,狭缝3mm,难道光没有打在狭缝中?还是说因为反应液不是均相的,我的底物是一种细菌多糖,用PBS溶解的,比较难溶,用了40度水浴和旋涡振荡,来回循环了很多次才能达到肉眼看不见颗粒物的程度,并且还有一些粘度
2楼2018-12-26 21:51:36
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热闹好呀

新虫 (小有名气)


小冀-: 金币+1, 鼓励回帖交流 2019-01-27 10:19:23
会不会是底物不纯的问题啊?要不要试试只有酶的话是什么情况

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3楼2019-01-26 22:55:36
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多多123456

新虫 (小有名气)

我也是在用吸光度测酶活,平行性不好,

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4楼2019-04-16 23:51:31
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金虫 (正式写手)

不知道你的问题解决没有,T6新世纪的紫外区是单独的氘灯,氘灯是有使用寿命的,而且就算不用也是会损耗,建议检查一下氘灯
5楼2019-06-17 16:59:20
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