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victory8737

铜虫 (初入文坛)

[交流] 关于基因克隆的一些问题(有效期至2009年6月1日)

我在做基因克隆的时候,遇到一个问题。就是在用设计的引物PCR跑出目标带后,进行切胶回收,连接转化等步培养。最后菌液pcr得到与之前回收时相同大小的带,送去测序,结果却并不是我所要克隆的那个基因。请大家帮帮我,这是怎么回事?谢谢啦

[ Last edited by sanko211 on 2009-4-30 at 22:13 ]
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郭继波

荣誉版主 (文学泰斗)

神龍教梦家园的小百姓-波波

优秀版主优秀版主

友情顶贴。。。。
菩提本无树,明镜亦非台。
2楼2009-04-30 22:42:40
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chuan7267

银虫 (小有名气)

很专业`` 不是很懂 呵呵 顶一下
3楼2009-04-30 22:58:05
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zhym1982

金虫 (正式写手)

什么研究所的啊
狼!幻想中我们的一族!~
4楼2009-05-01 08:37:33
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hg30717580

木虫 (职业作家)

总经理

太专业了,顶一下
突破自我,喜迎曙光
5楼2009-05-01 09:11:06
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dameng19831128

银虫 (小有名气)

★ ★ ★
victory8737(金币+1,VIP+0): 5-1 17:24
victory8737(金币+1,VIP+0):跟我的问题有些相关。我是按照EST序列设计的引物,没道理跑出来的目标带是错的啊?? 5-1 17:31
victory8737(金币+1,VIP+0): 5-1 17:32
你的引物是按照dna序列设计还是按照cDNA序列设计的?
很可能用设计的引物PCR跑出的目标带就不对。
6楼2009-05-01 10:23:37
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7楼2009-05-01 10:30:33
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dameng19831128

银虫 (小有名气)


victory8737(金币+1,VIP+0):很显然无法区分内含子和外显子。跑5‘race测出的序列找不到下游引物。那么请问:只能重新设计引物再做了吗? 5-3 09:42
引用回帖:
Originally posted by dameng19831128 at 2009-5-1 10:23:
你的引物是按照dna序列设计还是按照cDNA序列设计的?
很可能用设计的引物PCR跑出的目标带就不对。

EST就是cDNA啦,cDNA都是外显子,去除了内含子了,很可能你的序列不是连续的序列,是跨过了内含子的序列。也就是说你把内含子扩增出来了。不知道你明白不?
8楼2009-05-02 11:04:11
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dameng19831128

银虫 (小有名气)

★ ★
victory8737(金币+2,VIP+0): 5-5 21:44
如果是我说的这个原因的话只能重新设计引物了,最好能用相应的dna序列去设计引物。如果没有的话就不好办了。
9楼2009-05-03 12:47:39
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