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x8q4h11

木虫 (小有名气)

[交流] 有关菌液PCR

各位虫友,大家好,做过菌液PCR的分享一下经验吧。我开始的时候能够P出来,可是最近就是P不出来了……
我的方法:
取摇菌过夜菌液1mL,离心,去上清,用1mL双蒸水重悬菌体,沸水浴5-10分钟,取2微升菌液做PCR。

[ Last edited by 350784478 on 2009-9-19 at 13:13 ]
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xia710516

金虫 (正式写手)

这个没有什么经验可谈吧,很容易的
2楼2009-04-29 18:36:47
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader

miniPCR没什么要注意的,一般只要你的引物没错,菌液含有连有目的片段的载体,都可以出结果的
会当凌绝顶,一览众山小
3楼2009-04-29 18:44:14
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anik

银虫 (正式写手)

要好菌后直接取菌液进行PCR,不需要的其他的处理。
4楼2009-04-29 18:44:24
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)

换酶。。
5楼2009-04-29 20:55:31
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wuer413023

至尊木虫 (文坛精英)

没事领金币

我师兄一般都是加好dntp,buffer,ddh2o,引物,酶,然后用牙签蘸少许菌落到pcr管中进行pcr
上邪!我欲与君相知,长命无绝衰。山无陵,江水为竭,冬雷震震,夏雨雪,天地合,乃敢与君绝!
6楼2009-04-29 22:15:24
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aga0110125

银虫 (小有名气)

菌液不要加太多,沾一下即可,模板过多不利扩增,另外,第一步热变性时间稍长一点就可以了
7楼2009-04-30 11:15:19
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peizhilee

金虫 (小有名气)

1ul模板就可以了吧,一般就能做出来了。菌液太多有可能扩增出非特异条带。
一念成魔,一念成佛
8楼2009-04-30 11:38:08
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x8q4h11

木虫 (小有名气)

谢谢大家!
9楼2009-04-30 13:32:47
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thaw

铜虫 (小有名气)

按正常PCR配好体系后吸1微升菌液做模版
程序96℃5分钟——[95℃30秒-xx30 秒-72℃XX】——72℃10分钟-16℃
30个循环
10楼2009-04-30 16:00:33
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