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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 有关菌液PCR
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x8q4h11

木虫 (小有名气)

[交流] 有关菌液PCR

各位虫友，大家好，做过菌液PCR的分享一下经验吧。我开始的时候能够P出来，可是最近就是P不出来了……
我的方法：
取摇菌过夜菌液1mL,离心，去上清，用1mL双蒸水重悬菌体，沸水浴5-10分钟，取2微升菌液做PCR。

[ Last edited by 350784478 on 2009-9-19 at 13:13 ]
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1楼 2009-04-29 18:33:43
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xia710516

金虫 (正式写手)
这个没有什么经验可谈吧，很容易的
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2楼2009-04-29 18:36:47
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
miniPCR没什么要注意的，一般只要你的引物没错，菌液含有连有目的片段的载体，都可以出结果的
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会当凌绝顶，一览众山小
3楼2009-04-29 18:44:14
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anik

银虫 (正式写手)
要好菌后直接取菌液进行PCR，不需要的其他的处理。
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4楼2009-04-29 18:44:24
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)
换酶。。
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5楼2009-04-29 20:55:31
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wuer413023

至尊木虫 (文坛精英)

没事领金币
我师兄一般都是加好dntp，buffer，ddh2o，引物，酶，然后用牙签蘸少许菌落到pcr管中进行pcr
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上邪!我欲与君相知，长命无绝衰。山无陵，江水为竭，冬雷震震，夏雨雪，天地合，乃敢与君绝！
6楼2009-04-29 22:15:24
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aga0110125

银虫 (小有名气)
菌液不要加太多，沾一下即可，模板过多不利扩增，另外，第一步热变性时间稍长一点就可以了
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7楼2009-04-30 11:15:19
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peizhilee

金虫 (小有名气)
1ul模板就可以了吧，一般就能做出来了。菌液太多有可能扩增出非特异条带。
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一念成魔，一念成佛
8楼2009-04-30 11:38:08
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x8q4h11

木虫 (小有名气)
谢谢大家！
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9楼2009-04-30 13:32:47
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thaw

铜虫 (小有名气)
按正常PCR配好体系后吸1微升菌液做模版
程序96℃5分钟——[95℃30秒-xx30 秒-72℃XX】——72℃10分钟-16℃
30个循环
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10楼2009-04-30 16:00:33
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