24小时热门版块排行榜    

查看: 529  |  回复: 5
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

jhcln

金虫 (小有名气)

[交流] 有关提取水和土壤中总DNA

提取水和土壤中总DNA,异丙醇沉淀24h,离心,得到好多白色沉淀,请问这是析出的SDS还是别的什么东西?急切盼望各位指教!
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

引用回帖:
Originally posted by jhcln at 2009-4-29 09:59:


多谢楼上大哥指教,用得周集中的SDS高盐法!
这样的话,该怎样去除SDS呢?得到的粗DNA怎样纯化?具体纯化步骤能说得详细点吗?不要试剂盒的呵呵。另外这粗DNA还有色素,该如何除去?望各位大哥不吝赐教!!

指教称不上,呵呵,不要沉淀那么长时间,按照原文来,室温沉淀1h,然后离心收集DNA,土壤的生物量不是很多,所以最后贴在离心管壁上的带有黄褐色的那点东西就是DNA,然后可以加适量TE在4度让它溶解,不要急着用移液枪抽吸,很容易打断DNA.纯化方法取决于你最后的目的,入楼上所言,要是你PCR的话,选择一个比较简单的纯化方法,纯化到看不到黄褐色,然后稀释倍数PCR,肯定能出来.要是你的DNA要求量多纯度高的话就得选择一个好的纯化方法了,可以试试QIAGEN的胶回收试剂盒,40KB的那个,货号忘记了,你自己有目录的话翻翻看吧.
晕,不好意思,没有看见你 不要试剂盒 那句 ,那你就不要嫌麻烦,用透析袋方法来做吧,不过纯化效果不敢说很好,方法在  分子克隆手册上面有,你自己看看.透析袋的话上海生工的就可以了.
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
5楼2009-04-30 01:09:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

什么方法提取的?CTAB? 4度离心的?异丙醇沉淀的时候是在冰箱里面沉淀的么?说清楚点.如果白色沉淀很多的话就是SDS了.否则生物量不可能那么多的
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2009-04-29 01:21:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jhcln

金虫 (小有名气)

求助

引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2009-4-29 01:21:
什么方法提取的?CTAB? 4度离心的?异丙醇沉淀的时候是在冰箱里面沉淀的么?说清楚点.如果白色沉淀很多的话就是SDS了.否则生物量不可能那么多的

多谢楼上大哥指教,用得周集中的SDS高盐法!
这样的话,该怎样去除SDS呢?得到的粗DNA怎样纯化?具体纯化步骤能说得详细点吗?不要试剂盒的呵呵。另外这粗DNA还有色素,该如何除去?望各位大哥不吝赐教!!
3楼2009-04-29 09:59:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

haoran930

银虫 (小有名气)

现在试剂盒纯化很方便,也不是很贵,效果很好,可以试一下。我们做土壤微生物DNA也试过自己纯化,效果不好。如果后续做PCR可以稀释大倍数试一下
4楼2009-04-29 22:00:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料化工调剂 +10 今夏不夏 2026-03-01 11/550 2026-03-01 19:49 by 无懈可击111
[考研] 高分子化学与物理调剂 +6 好好好1233 2026-02-28 12/600 2026-03-01 19:48 by 好好好1233
[考研] 化工299分求调剂 一志愿985落榜 +5 嘻嘻(*^ω^*) 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:47 by 无际的草原
[考研] 298求调剂 +6 axyz3 2026-02-28 6/300 2026-03-01 19:00 by 18137688336
[考研] 一志愿中南大学理学化学 +4 15779376950 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:00 by Fff-1
[考研] 材料类求调剂 +10 wana_kiko 2026-02-28 11/550 2026-03-01 18:11 by 海嵙Y
[考研] 328求调剂 +3 aaadim 2026-03-01 5/250 2026-03-01 17:29 by njzyff
[考研] 化工专硕348,一志愿985求调剂 +5 弗格个 2026-02-28 8/400 2026-03-01 17:25 by sunny81
[考研] 285求调剂 +8 满头大汗的学生 2026-02-28 8/400 2026-03-01 16:47 by caszguilin
[考研] 311求调剂 +6 亭亭亭01 2026-03-01 6/300 2026-03-01 15:41 by 324616
[考研] 材料工程274求调剂 +3 Lilithan 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:58 by ms629
[考研] 材料284求调剂,一志愿郑州大学英一数二专硕 +10 想上岸的土拨鼠 2026-02-28 10/500 2026-03-01 14:12 by yc258
[考研] 302材料工程求调剂 +4 Doleres 2026-03-01 5/250 2026-03-01 11:52 by liqiongjy
[考研] 317一志愿华南理工电气工程求调剂 +6 Soliloquy_Q 2026-02-28 11/550 2026-03-01 11:14 by 歌liekkas
[考博] 博士自荐 +4 kkluvs 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:19 by 馥安馥安
[硕博家园] 2025届双非化工硕士毕业,申博 +3 更多的是 2026-02-27 4/200 2026-03-01 10:04 by ztg729
[论文投稿] Optics letters投稿被拒求助 30+3 luckyry 2026-02-26 4/200 2026-03-01 09:06 by babero
[基金申请] 面上模板改不了页边距吧? +5 ieewxg 2026-02-25 6/300 2026-03-01 00:10 by addressing
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +8 吃宵夜1 2026-02-28 10/500 2026-02-28 20:27 by L135790
[考研] 276求调剂 +3 路lyh123 2026-02-28 4/200 2026-02-28 19:45 by 路lyh123
信息提示
请填处理意见