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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 有关提取水和土壤中总DNA
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jhcln

金虫 (小有名气)

[交流] 有关提取水和土壤中总DNA

提取水和土壤中总DNA，异丙醇沉淀24h，离心，得到好多白色沉淀，请问这是析出的SDS还是别的什么东西？急切盼望各位指教！
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1楼 2009-04-29 00:15:21
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
什么方法提取的?CTAB? 4度离心的?异丙醇沉淀的时候是在冰箱里面沉淀的么?说清楚点.如果白色沉淀很多的话就是SDS了.否则生物量不可能那么多的
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2009-04-29 01:21:42
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jhcln

金虫 (小有名气)

求助

引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2009-4-29 01:21:
什么方法提取的?CTAB? 4度离心的?异丙醇沉淀的时候是在冰箱里面沉淀的么?说清楚点.如果白色沉淀很多的话就是SDS了.否则生物量不可能那么多的

多谢楼上大哥指教，用得周集中的SDS高盐法！
这样的话，该怎样去除SDS呢？得到的粗DNA怎样纯化？具体纯化步骤能说得详细点吗？不要试剂盒的呵呵。另外这粗DNA还有色素，该如何除去？望各位大哥不吝赐教！！
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3楼2009-04-29 09:59:16
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haoran930

银虫 (小有名气)
现在试剂盒纯化很方便，也不是很贵，效果很好，可以试一下。我们做土壤微生物DNA也试过自己纯化，效果不好。如果后续做PCR可以稀释大倍数试一下
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4楼2009-04-29 22:00:14
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
引用回帖:
Originally posted by jhcln at 2009-4-29 09:59:


多谢楼上大哥指教，用得周集中的SDS高盐法！
这样的话，该怎样去除SDS呢？得到的粗DNA怎样纯化？具体纯化步骤能说得详细点吗？不要试剂盒的呵呵。另外这粗DNA还有色素，该如何除去？望各位大哥不吝赐教！！

指教称不上,呵呵,不要沉淀那么长时间,按照原文来,室温沉淀1h,然后离心收集DNA,土壤的生物量不是很多,所以最后贴在离心管壁上的带有黄褐色的那点东西就是DNA,然后可以加适量TE在4度让它溶解,不要急着用移液枪抽吸,很容易打断DNA.纯化方法取决于你最后的目的,入楼上所言,要是你PCR的话,选择一个比较简单的纯化方法,纯化到看不到黄褐色,然后稀释倍数PCR,肯定能出来.要是你的DNA要求量多纯度高的话就得选择一个好的纯化方法了,可以试试QIAGEN的胶回收试剂盒,40KB的那个,货号忘记了,你自己有目录的话翻翻看吧.
晕,不好意思,没有看见你 不要试剂盒 那句 ,那你就不要嫌麻烦,用透析袋方法来做吧,不过纯化效果不敢说很好,方法在  分子克隆手册上面有,你自己看看.透析袋的话上海生工的就可以了.
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
5楼2009-04-30 01:09:22
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jhcln

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2009-4-30 01:09:



指教称不上,呵呵,不要沉淀那么长时间,按照原文来,室温沉淀1h,然后离心收集DNA,土壤的生物量不是很多,所以最后贴在离心管壁上的带有黄褐色的那点东西就是DNA,然后可以加适量TE在4度让它溶解,不要急着用移液枪 ...

非常感谢！
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6楼2009-05-06 17:33:30
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