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构建载体一直不成功 已有1人参与
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想把目的基因a连在环状载体上，一直构不成功 基因大小2.7kb 说明一下，pcr产物验证没问题，酶切位点选择也核对过没有问题，37度双酶切过夜，胶回收。酶连体系，基因与载体1:5-10都试过，4度过夜连和常温下1-4小时都试过，感受态公司制备， 转化后涂LA平板，长出的单克隆有50个左右.菌落pcr鉴定，通用引物上游加目的基因下游，只有3个有条带，送测序，测序结果不对 还有一种情况是通用引物上游加目的基因下游，无条带，用目的基因的上下游进行菌p验证，用目的基因片段作正对照，有10个左右有条带，提质粒送测序，结果还是不对 已经构了很长时间了，一直不成功，相当迷茫 ，希望能有人能指点一下 发自小木虫IOS客户端 |
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